收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪瘟病毒E2基因在PK-15细胞中的表达及本体动物的免疫研究

刘建玲  
【摘要】: 猪瘟(Classical Swine Fever, CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪的急性高度接触性传染病,是严重威胁养猪业,具有重要经济意义的病毒性疾病之一。猪瘟病毒可引起猪小血管和毛细血管内皮细胞发生变性、坏死,表现为全身组织器官弥漫性出血。猪瘟病毒为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的成员,基因组大小约12.3kb,含一个大的开放阅读框(ORF),由11个编码结构蛋白与非结构蛋白的基因组成。 猪瘟病毒E2基因编码的gp55蛋白是猪瘟病毒的主要保护性抗原,是研制猪瘟基因工程疫苗的首选基因。采用来源于猪的PK–15细胞做为表达系统,一方面可利用猪细胞对猪瘟病毒遗传密码子的嗜好性,提高E2蛋白的表达量,另一方面猪源细胞表达的E2蛋白的加工与其他表达系统相比有无比的优越性,其免疫原性和疫苗的免疫保护力可望得到很大提高,为猪瘟病毒基因工程疫苗投入实际应用奠定基础。 本研究由三部分构成,第一部分是采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)克隆出猪瘟病毒石门株的E2基因,并对其核苷酸序列及氨基酸序列的同源性进行比较及分析,绘制系统关系发生树,以期了解猪瘟病毒石门株经多次传代后E2基因的遗传变异情况,为用其研制猪瘟基因工程疫苗提供毒株分子生物学方面的资料。第二部分是用逆转录病毒载体将猪瘟病毒囊膜蛋白E2基因整合到PK-15细胞基因组中,在PK-15细胞的细胞膜上表达猪瘟病毒E2基因囊膜蛋白。第三部分用表达囊膜蛋白的PK-15细胞免疫Balb/c小鼠和猪,检测抗体水平,并对免疫接种猪进行攻毒试验,为猪瘟基因工程疫苗的应用奠定基础。 1.采用RT-PCR和nPCR扩增出猪瘟病毒石门株E2基因,将其分别克隆于pGEM-T Easy载体并进行核苷酸序列测定,进行了核苷酸及氨基酸序列同源性比较,绘制了系统关系树。结果表明,所测CSFV石门株E2基因的长度为1170 bp,编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列,共由384个氨基酸组成。将石门株与C株疫苗毒E2基因的核苷酸和所推导的氨基酸序列进行比较,表明其核苷酸序列同源性为94.5%,所推导的氨基酸序列同源性为93. 8%,说明石门株与C株疫苗毒之间存在一定的差异。 2.将猪瘟病毒石门株E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染,将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析和免疫荧光染色鉴定,结果表明猪瘟病毒E2基因在PK-15细胞膜上成功表达。 3.将表达E2蛋白的PK-15细胞作为基因工程细胞苗腹腔免疫Balb/c小鼠,经FACS


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李春阳,单松华,华修国;2个猪瘟野毒株E2基因主要抗原区域的扩增及其序列分析[J];上海交通大学学报(农业科学版);2003年03期
2 王青;胡建和;郑素玲;吴玉苹;;猪瘟病毒E2基因活载体疫苗研究进展[J];动物医学进展;2010年07期
3 李明晖,刘湘涛,韩雪清,侯文通,赵启祖,马军武,刘伯华,刘在新,李健强,李忠润,谢庆阁;4株猪瘟流行野毒株病毒结构蛋白E2基因的核苷酸序列分析[J];中国兽医科技;2001年05期
4 刘建玲;苏正元;许信刚;李谱华;张彦明;;猪瘟病毒Shimen株E2基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建[J];中国兽医学报;2006年03期
5 刘伯华,刘湘涛,韩雪清,赵启祖,李明晖,谢庆阁;急、慢性猪瘟病毒分离株和疫苗株E2基因的序列分析[J];畜牧兽医学报;2001年06期
6 顾玲,王强,郑月茂,安志兴,马利兵,张涌;猪瘟病毒E_2基因乳腺特异表达载体的构建[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2004年11期
7 胡慧,邱昌庆,张彦明;猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达[J];中国兽医科技;2004年01期
8 王琴,郎洪武,王在时,丘惠深,李博;猪瘟病毒E2基因的克隆与鉴定[J];畜牧兽医学报;2001年06期
9 魏中锋,张彦明,孙裴,张永国,洪海霞,倪斌,郭抗抗;猪瘟病毒石门株动物传代脾毒与组织培养细胞毒E2基因序列的分析[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2005年06期
10 杨文超;谢金文;余为一;;猪瘟病毒E2基因的克隆及其初步鉴定[J];安徽农业科学;2007年25期
11 薛青红,刘湘涛,杜守山,张永国,韩雪清,张彦明,何学斌,庄淑珍,谢庆阁;河南省猪瘟流行毒的E_2基因序列分析和基因分型[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2002年02期
12 蒋毅立;韦柳青;郭冬;冯励;陆芹章;罗廷荣;;从母猪白细胞检出猪瘟病毒[J];广西畜牧兽医;2008年05期
13 张永国,刘湘涛,韩雪清,张彦明,薛青红;广西猪瘟流行毒与C-株疫苗毒gp55(E_2)主要抗原区DNA序列差异的比较[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2002年01期
14 余兴龙,涂长春,李红卫,陈创夫,李作生,马正海,孙明,殷震;猪瘟病毒E2基因真核表达质粒的构建及基因疫苗的研究[J];中国病毒学;2000年03期
15 袁朝霞;甘浪帆;余艳娟;张远波;张红云;宁艳红;韩改会;陆芹章;罗廷荣;;健康猪扁桃体和流产胎儿分离猪瘟病毒E2基因的序列分析[J];广西农业科学;2008年05期
16 满朝来,李一经;猪瘟病毒国内分离株(HL-LY)E_2基因的克隆及序列分析[J];黑龙江畜牧兽医;2003年02期
17 孙元;刘大飞;王宇飞;李宏宇;梁冰冰;李娜;仇华吉;;表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒对猪的免疫效力评价[J];中国动物传染病学报;2009年01期
18 查云峰,徐兴然,肖昌,余兴龙,涂长春;猪瘟病毒E2基因在昆虫细胞中的分泌表达及活性检测[J];畜牧兽医学报;2005年10期
19 马秋明;张建安;王强;朱小甫;王文江;何维明;;陕西省猪瘟病毒流行毒株E2基因变异分析初报[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2007年05期
20 范学政,王琴,陈振海,王在时,赵耘,宁宜宝;绿色荧光蛋白基因与猪瘟兔化弱毒疫苗株E2基因在杆状病毒中的融合表达[J];中国兽医学报;2005年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王琴;王在时;李博;丘惠深;郎洪武;;猪瘟病毒强弱毒株和野毒株E2全基因序列测定及比较分析[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
2 陆芹章;韦栋平;罗廷荣;刘芳;黄伟坚;温荣辉;廖素环;吴显实;余克伦;;广西流行猪瘟病毒的检测及E2基因扩增条件的优化[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
3 贾洪林;仇华吉;李国新;朱庆虎;李娜;童光志;;猪瘟病毒E~(rns)和E2基因的高效表达与E~(rns)-ELISA鉴别诊断方法的建立[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集[C];2004年
4 刘道新;陈杰;邱伯根;李晓成;谈志祥;邱立新;黄保续;鲁杏华;任凤梅;范仲鑫;;湖南省规模猪场猪瘟流行毒株分子流行病学调查及研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
5 黄涛;汤德元;李春燕;曾智勇;徐健;王彬;张晓杰;王凤;;猪瘟病毒E2基因原核表达的研究[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会2009年学术年会“回盛生物”杯全国养猪技术论文大赛论文集[C];2009年
6 黄涛;汤德元;李春燕;曾智勇;徐健;王彬;张晓杰;王凤;;猪瘟病毒E2基因原核表达的研究[A];第四届中国畜牧科技论坛论文集[C];2009年
7 余兴龙;涂长春;徐兴然;刘伯华;肖昌;张茂林;马刚;扈荣良;李吉平;;猪瘟病毒主要保护性抗原E2基因及其与猪IL—6cDNA融合基因在大肠杆菌中的高效表达[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
8 郑小坚;;猪瘟病毒F114株E2基因在家蚕杆状病毒表达系统中的融合表达[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
9 蒋毅立;罗廷荣;陆芹章;;从繁殖障碍猪分离的猪瘟病毒E2基因的克隆和序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
10 冯励;蒋毅立;罗廷荣;陆芹章;;从广西繁殖障碍猪分离的猪瘟病毒E2基因的多态性分析[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘建玲;猪瘟病毒E2基因在PK-15细胞中的表达及本体动物的免疫研究[D];西北农林科技大学;2006年
2 韩雪清;猪瘟病毒E2基因遗传变异及体外表达研究[D];西北农林科技大学;2002年
3 刘伯华;猪瘟病毒E2基因在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的制备[D];中国人民解放军军需大学;2002年
4 孙永科;表达猪瘟病毒石门株E0/E2基因重组腺病毒的构建及其免疫效果研究[D];西北农林科技大学;2007年
5 张永国;猪瘟Shimen株致猪血管内皮细胞病变前后表达差异基因寻找及E2基因PK-15细胞表达[D];西北农林科技大学;2005年
6 李克强;重组逆转录病毒载体介导人ANGPTL4基因转染的抗肿瘤作用[D];浙江大学;2005年
7 钱东华;自杀基因、血卟啉联合治疗肺癌的实验研究[D];吉林大学;2007年
8 郭焕成;猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒寡核苷酸芯片的研究与应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
9 吴健敏;猪瘟病毒E2抗原在T4噬菌体表面的展示及免疫原性的研究[D];中国人民解放军军需大学;2002年
10 张富强;应用噬菌体展示技术进行猪瘟病毒结构(糖)蛋白E2和E~(rns)中和抗原表位鉴定和比较[D];中国人民解放军军需大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 满朝来;猪瘟病毒HL-LY地方株E2基因在毕赤酵母中的表达及高效表达条件的探索[D];东北农业大学;2003年
2 赵志军;猪瘟病毒E2基因克隆、序列分析及最佳猪瘟免疫程序的制定[D];河北农业大学;2003年
3 张永国;猪瘟病毒E2基因的克隆及在原核中的高效表达[D];西北农林科技大学;2002年
4 袁朝霞;广西猪瘟病毒扁桃体和流产胎儿来源株E2基因的克隆、测序及遗传学分析[D];广西大学;2004年
5 姚淑瑜;猪瘟病毒E2基因杆状病毒转移载体的构建及病毒诱导细胞凋亡的研究[D];广西大学;2004年
6 季新成;猪瘟病毒E2基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达[D];西北农林科技大学;2004年
7 顾玲;猪瘟病毒E2基因乳腺特异表达载体的构建与细胞表达的研究[D];西北农林科技大学;2004年
8 侯强;猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的表达及其单克隆抗体的制备[D];中国农业科学院;2006年
9 张玉德;我国西北三省近年猪瘟分子流行病学分析[D];甘肃农业大学;2006年
10 胡慧;猪瘟病毒E2基因的表达及其间接ELISA诊断方法的研究[D];西北农林科技大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 行唐县畜牧局兽医防疫站 金秀英;猪发高烧会是得啥病[N];河北科技报;2009年
2 中国兽药监察所 副研究员 王琴;猪瘟病毒E2基因的研究进展及其应用[N];中国畜牧水产报;2000年
3 本报记者 姜楠;让百姓吃到放心猪肉[N];吉林日报;2008年
4 云南省红河州开远市中和营镇畜牧兽医站 宋超 开远市动物卫生监督所 张金德;双月子猪高烧不退发病原因及防治措施[N];中国畜牧兽医报;2009年
5 张建刚;当前猪瘟流行的新特性[N];中国畜牧报;2003年
6 ;猪瘟疫苗免疫失败原因分析及对策[N];中国畜牧兽医报;2009年
7 蔡涛 关景火 李德华;塑造“面子”[N];计算机世界;2002年
8 袁华;猪夏季高热性疾病的防治[N];江苏农业科技报;2010年
9 瑞普(天津)生物药业有限公司 李刚 谢雪松;控制商品子猪综合征有效办法初探[N];中国畜牧兽医报;2009年
10 季作善 曹同德 李连任;我国猪瘟流行现状与防治对策[N];中国畜牧报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978