豆类丝核菌及其次级代谢产物有效成分的分离研究

【摘要】： 目的:旨在探索豆类丝核菌菌丝体及其次级代谢产物的成分,分析其各成分的用途,为开拓豆类丝核菌的新用途奠定理论基础。 方法:1.定期用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)移接豆类丝核菌,使之保持旺盛的生长力。2.将特定的豆类丝核菌菌株用改良的Czapek’s培养基进行培养,获得豆类丝核菌培养液和豆类丝核菌菌丝体。3.用不同的方法对菌丝体和次级代谢产物分别进行处理。①对豆类丝核菌菌丝体的处理:将自然干燥的豆类丝核菌菌丝体用0.5%的盐酸进行浸泡24h后应用40KHz超声波清洗器在70℃处理30min,收集提取液,如此重复三次,合并提取液。将提取液在60℃条件下减压浓缩,备用。用2mol/L盐酸调提取液为pH 2,加入新鲜配制的雷氏盐饱和水溶液,有沉淀生成,滤集生成的沉淀,并将沉淀溶于丙酮,滤除不溶物,向丙酮溶液中加入硫酸银饱和水溶液,使沉淀分解。过滤后向滤液中加入一定量氯化钡溶液,过滤,滤液用2mol/L氨水将之调pH 10,挥干得到褐色粘稠状带有特异性香味的物质。将其在90℃下减压升华得到白色晶体。②对豆类丝核菌培养液的处理:方法一,取1000ml预处理完备的豆类丝核菌培养液,在60℃减压浓缩,浓缩液调pH 2,用正丁醇萃取10次,得到有机相和酸水液。将酸水液调至pH 10,再用正丁醇萃取10次得到水相和有机相。有机相用0.2mol?L的稀硫酸萃取,得到水相和有机相。将水相用浓氨水碱化后浓缩至干,所得浸膏减压升华得到白色粉末状物质。方法二,取1000ml预处理完备的豆类丝核菌培养液,调pH 10,用H2O:CH2Cl2 (3∶1, v/v )萃取,弃去CH2Cl2层,将水层调pH 10后,再用H2O∶CH2Cl2(3∶1, v/v )萃取,弃去CH2Cl2层,将水层调pH 7,浓缩后上732型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂,先用去离子水冲洗,后用1mol/LNH4OH洗脱,收集氨洗液,调pH 7,浓缩后冻干,得到浅黄色粉末,将之减压升华得到白色粉末状物质。方法三,取1000ml预处理完备的豆类丝核菌培养液,调pH7,上大孔吸附树脂,反复富集5次,静置12h,用滴水冲洗,洗2个柱体积,收集水洗脱液,再用乙醇洗脱,收集约2个柱体积的醇水混合洗脱液,最后收集2个柱体积的醇洗脱液,分别减压浓缩各洗脱段的液体,经TLC检测,合并醇洗液,减压回收乙醇,余液冻干,得到褐色粉末。TLC则可检出,与标准品对照,均呈现淡紫色,但由于纯度较差难以升华。 结果:经过熔点测定仪和GC-MS检测,初步鉴定豆类丝核菌菌丝体中可能含有蒲公英甾醇、α-香树脂醇、大狼毒素以及两种未知的化合物。这几种物质均是首次从豆