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Aroclor 1254对小鼠早期胚胎体外发育毒性的研究

杨培先  
【摘要】: 本试验从体外培养小鼠2-细胞胚胎开始,在小鼠胚胎体外培养液中加入不同浓度剂量的Aroclor 1254,探讨Aroclor 1254对小鼠早期胚胎体外发育的影响,分析Aroclor 1254对小鼠早期胚胎发育的毒性机制。 1.筛选了适合昆白系小鼠胚胎体外发育的培养体系。选择6,7,8,9和10周龄昆白系小鼠,进行超数排卵和配种,取出并计数2-细胞小鼠胚胎;将2-细胞胚胎分别放入体积分数10 %的胎牛血清(FBS)、牛血清(BS)和新生牛血清(NBS)的不同CZB培养液中取代牛血清白蛋白(BSA),并设BSA对照组;在胚胎放入含10 % NBS培养液的0,8,16和24 h的培养液中加入5.56 mmol/L葡萄糖浓缩液。结果,6,7,8,9和10周龄每只小鼠平均获取可用枚胚胎数分别为16.8,37.3,47.9,44.1和41.5枚,8周龄和9周龄小鼠可用胚率为90.9 %和89.9 %,显著高于6周龄和7周龄可用胚率(p0.05);CZB培养液中含有体积分数为10 %的NBS的囊胚发育率(83.3 %)和孵化率(71.4 %)极显著高于体积分数10 %的FBS和BS组(30.6 %, 55.4 %)和(18.8 %, 43.0 %)(p0.01);不添加组,0,8,16和24 h将培养的胚胎移入含有5.56 mmol/L葡萄糖的CZB培养液的桑椹胚率分别为58.7 %,0,75.9 %,90.5 %和78.8 %,囊胚率分别为30.4 %,0,53.1 %,84.6 %和41.7 %,16 h组极显著高于0,8 h和24 h组。结论认为,8周龄和9周龄的小鼠超排效果最佳;FBS、BS都不能有效代替BSA,NBS可以代替BSA取得较理想的试验结果;CZB中培养16 h换成含有葡萄糖的CZB液中培养,能更好的提高囊胚发育率(84.6 %)。 2.探讨Aroclor 1254对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响。将小鼠2-细胞,分别培养于Aroclor 1254浓度为0.05,0.25,1.25μg/mL和6.25μg/mL的胚胎培养液中,并设Aroclor 1254溶剂对照组(添加乙醇)和空白对照组。结果表明,0.05μg/mL的Aroclor 1254会影响2-细胞胚的孵化(55.7 %),与溶剂对照组(66.7 %)差异显著(p0.05);0.25μg/mL的Aroclor 1254组,2-细胞胚的囊胚发育率(72.5 %)及囊胚孵化率(23.2 %)与溶剂对照组(84.2 %,66.7 %)差异极显著(p0.01);1.25μg/mL的Aroclor 1254组,2-细胞胚发育到8-细胞阶段的比率(32.1 %)极显著低于对照组(p0.01);6.25μg/mL的Aroclor 1254组,2-细胞胚发育到4-细胞和8-细胞阶段的比率(58.1 %和29.6 %)极显著低于对照组(p0.01)。结论认为,Aroclor 1254对小鼠2-细胞胚胎体外发育存在明显的剂量-毒性关系,随着培养液中Aroclor 1254浓度的增加,对小鼠早期胚胎的发育毒性表现地越早;胚龄越小,毒性敏感性越强。 3.探讨Aroclor 1254对小鼠8-细胞胚胎体外发育的影响。将小鼠8-细胞胚胎,分别培养于Aroclor 1254浓度为0.05,0.25,1.25μg/mL和6.25μg/mL的胚胎培养液中,并设Aroclor 1254溶剂对照组(添加乙醇)和空白对照组。结果表明,0.05μg/mL的Aroclor 1254对8-细胞胚发育无明显影响;0.25μg/mL的Aroclor 1254会影响8-细胞胚的孵化(64.7 %),与溶剂对照组差异显著(p0.05);1.25μg/mL的Aroclor 1254组,8-细胞胚囊胚发育率(68.6 %)及孵化率(25.5 %)极显著低于溶剂对照组(92.4 %,75.7 %)(p0.01);6.25μg/mL Aroclor 1254组的8-细胞胚未能发育。结论认为,Aroclor 1254对小鼠8-细胞胚胎体外发育有毒性作用,存在明显的剂量——毒性关系。


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