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猕猴桃果实L-GalLDH、DHAR基因cDNA片段克隆和种质资源的RAPD分析

牛歆雨  
【摘要】: 中国是猕猴桃属植物的起源和分布中心,种质资源极为丰富,可为猕猴桃遗传改良和资源利用提供广泛的背景材料。由于地理分布的重叠和种类间的自然杂交,产生了多种中间过渡类型,使其种间和种内品种的界线并不十分清晰。猕猴桃的栽培品种主要是中华猕猴桃和美味猕猴桃。培育优良品种仍是猕猴桃生产的一项迫切任务,基因克隆和分子标记已广泛的应用于猕猴桃育种研究,并已取得很多成果。 在公认的抗坏血酸L-半乳糖合成途径中L-半乳糖内酯脱氢酶直接氧化半乳糖内酯形成AsA,起着关键酶的作用,脱氢抗坏血酸还原酶以谷胱甘肽为底物,催化脱氢抗坏血酸还原为抗坏血酸,在循环利用抗坏血酸、保护细胞组分抵御氧化损伤中发挥重要的作用。为了解抗坏血酸的积累机理,本试验对L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶进行了克隆方面的研究。 “华优”是一个猕猴桃新品种,为了解它的生物学和遗传特性,为生产研究和品种保护打下基础。本研究从生物学特性、物候期、结果习性对其进行了观察且与秦美、红阳进行比较,并进一步作了RAPD分析,进行系统聚类。 同时也对周至猕猴桃试验站和周至猕猴桃研究所提供的猕猴桃资源52份试验材料作了RAPD的分析,以期为合理利用猕猴桃种质资源以及选配杂交育种亲本、选育猕猴桃新品种提供理论依据。试验结果如下: 1.克隆得到了猕猴桃L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶基因的中间片段。它们cDNA片段长分别为857bp、594bp,编码286个和198个氨基酸。猕猴桃L-GalLDH基因核苷酸与刺梨L-GalLDH相似性达88%,DHAR基因核苷酸与苹果DHAR相似性达98%。 2.华优品种花、果、叶、枝、皮孔等大部分生物学性状与红阳相同,结果习性等很少部分性状与秦美相同,物候期介于秦美和红阳之间;RAPD的扩增结果进行聚类分析后发现,华优与中华猕猴桃的遗传距离在0.3143-0.4667之间,而与海沃德等5个美味猕猴桃品种的遗传距离在0.4194-0.8333之间。进一步说明华优是一个兼有美味猕猴桃和中华猕猴桃特征的新品种,各种性状与中华猕猴桃的性状相似程度更高。 3.种质资源的RAPD的分析中,从90条引物中筛选出扩增效果较好的引物30条,30条引物对52份材料共扩增出246个条带,其中具有多态性的212条,占86.2%。聚类分析表明:美味猕猴桃和中华猕猴桃亲缘关系非常近,几个猕猴桃野生种之间遗传距离相对较远,另外美味猕猴桃里的大部分品种之间遗传距离很近。


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