收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

西农萨能奶山羊乳腺cDNA文库构建和LPL基因的克隆与序列分析

韩雪峰  
【摘要】: 为了解山羊乳腺组织基因表达信息,进行乳腺比较基因组学、功能基因组学研究,并促进山羊奶膻味形成机理研究,本研究以西农萨能奶山羊为材料,构建泌乳中期乳腺组织的cDNA文库。文库质量鉴定后,从文库中挑选部分克隆进行测序分析,同时根据LPL基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR、5′-RACE方法并结合cDNA文库PCR扩增方法获得LPL基因全长cDNA序列,并对该序列进行生物信息学分析,利用实时定量PCR分析LPL基因在不同泌乳期乳腺的表达模式,取得如下结果: 1.利用质粒载体构建了西农萨能奶山羊泌乳中期乳腺组织cDNA文库,并对文库质量进行了鉴定。结果显示乳腺文库滴度为1.9x10~6cfu/mL,文库容量为1.4x10~7 cfu,重组率为96%,平均插入片段长度在1.1 kb以上,结果表明成功构建山羊乳腺组织cDNA文库; 2.从西农萨能奶山羊乳腺cDNA文库中随机挑取部分克隆进行5′EST单向测序,结果得到115个测序结果,测序成功率为89.8%。利用GenBank非冗余核苷酸数据库对所获得的115个ESTs序列进行了同源性分析,并对没有匹配的序列进一步在EST数库中进行了同源性比较。结果显示,在所测115个山羊乳腺组织ESTs中存在22个已知功能基因,另外有29个序列为未知EST序列。有5个山羊基因被鉴定出来,分别代表5类蛋白质,分别是:β-乳球蛋白,αs2-酪蛋白,前α-乳白蛋白,糖酰化依赖的细胞粘附分子-1和脂肪酸合酶。所测的115个ESTs序列已全部提交GenBank,并取得了序列的Accession No.; 3.通过RT-PCR方法克隆西农萨能奶山羊乳腺LPL基因编码区(Coding Sequence,CDS)和3′端非翻译区(3′-UTR)的1546-3064片段,利用5′-RACE方法扩增得到LPL基因5′端非翻译区(5′-UTR),利用cDNA文库扩增得到LPL基因3′末端,对上述片段进行序列拼接,得到西农萨能奶山羊乳腺LPL基因全长cDNA,cDNA序列全长为3630 bp,其中CDS区1437 bp,3′-UTR区1990 bp,5′-UTR区203 bp; 4.对西农萨能奶山羊LPL基因cDNA序列进行了生物信息学分析。CDS区全长1437bp,编码478个氨基酸,CDS区序列已登陆GenBank,注册号为:DQ997818。西农萨能奶山羊LPL基因CDS序列(DQ99781 8)与绵羊(NM_001009394)、牛(NM_001075120)、猪(AY559453)、人(NM_000237)和小鼠(NM_008509)相应区域核苷酸同源性分别为98%、98%、91%、89%和87%,氨基酸同源性分别为98%、98%、92%、90%和88%,在编码区88-102位较人、鼠LPL基因编码区比人和鼠多9个碱基,3个氨基酸,同时经过蛋白质功能域预测,西农萨能奶山羊LPL较人LPL多一个潜在功能基序。 5.用实时定量PCR方法检测西农萨能奶山羊LPL基因在泌乳前期、盛期、中期、后期及干奶期五个不同泌乳阶段的表达丰度,结果表明LPL基因在泌乳初期的表达丰度最高,其次是泌乳盛期和末期,在干奶期表达量最低。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张翅;戴国飞;刘军立;夏炎枝;甘南琴;红凌;;盐胁迫下杜氏盐藻(Dunaliella salina)cDNA文库的构建与新表达序列标签(EST)的获取、分析[J];武汉大学学报(理学版);2009年03期
2 贺福初;邢桂春;吴祖泽;;人胎肝cDNA文库的构建[J];军事医学科学院院刊;1992年02期
3 刘敏;张伟;陈天艳;蔺淑梅;赵良;刘锦锋;赵英仁;张树林;;丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定[J];西安交通大学学报(医学版);2006年01期
4 牛永东;许丽艳;韩溟;方王楷;沈忠英;李恩民;;酵母单杂交筛选实验中的关键问题[J];中国实验诊断学;2006年07期
5 徐锋;武晓丽;邱德文;;利用磁珠构建稻瘟菌cDNA文库[J];微生物学报;2008年06期
6 史冬燕;杨明挚;黄兴奇;陈善娜;程在全;;元江普通野生稻叶片cDNA文库的构建及部分基因片段分析[J];遗传;2008年06期
7 柳丽平;李杰;王翠;阎赟梦;薛乐勋;;杜氏盐藻cDNA文库的构建及KCBP基因的克隆[J];郑州大学学报(医学版);2010年06期
8 李鑫;邹毅辉;杨晓亮;李桂芳;李峰;陈芳;石国庆;高剑峰;;中国美利奴羊外周免疫器官cDNA文库的构建及鉴定[J];石河子大学学报(自然科学版);2010年05期
9 张荷;毛君婷;杨颖;王开功;周碧君;文明;;鸭肠炎病毒感染鸭肝酵母双杂交cDNA文库的构建[J];中国兽医科学;2011年05期
10 叶秋,陈放;水稻成熟花粉cDNA文库的构建与分析[J];四川大学学报(自然科学版);2001年02期
11 许若丹;钟理;李继刚;张伟;柳伟强;王志强;吴策;赵美玲;;赤子爱胜蚓全长cDNA文库的构建及初步鉴定[J];河北农业大学学报;2006年03期
12 付杨;高翔;敖曼;王钦美;王丽;;香雪兰花瓣总RNA的提取和cDNA文库的构建[J];东北师大学报(自然科学版);2008年03期
13 肖晶;符芳;李海忠;张永欣;柴政;蔡雪辉;宋淑萍;李曦;;高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血单核细胞cDNA文库的构建[J];中国兽医科学;2009年08期
14 陈璐;姜国良;刘云;仇磊;项鹏;;刺参肌肉组织cDNA文库的构建[J];海洋科学;2009年12期
15 宋学文,赵崇,周仁,郭善一,张镜宇;大鼠脑cDNA文库的构建[J];生物化学与生物物理进展;1996年02期
16 王敏,刘萍,石明旺,王清连;野生大豆种子cDNA文库的构建与分析[J];生物技术通讯;2005年05期
17 汤文文;张文;曹祥荣;张锡然;徐春茂;王强;胡均;;毛冠鹿大脑组织全长cDNA文库构建[J];动物学杂志;2006年01期
18 张文;汤文文;庞宏;曹祥荣;戴君勇;张锡然;徐春茂;王强;胡均;;毛冠鹿睾丸组织cDNA文库的构建及P1精蛋白基因的克隆[J];兽类学报;2006年02期
19 王治涛;高帆;张淑文;秦晓波;徐莺;;麻疯树胚乳cDNA文库的构建与分析[J];四川大学学报(自然科学版);2007年01期
20 李红亮;杨渝晓;沈立荣;高其康;程家安;;中华蜜蜂工蜂头部cDNA文库的构建与分析[J];中国蜂业;2007年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王小静;沈向真;王喜乐;陈秀霞;杨俊花;赵茹茜;陈杰;;几种不同调控剂对山羊乳脂中共轭亚油酸(CLA)及乳腺组织SCD基因表达的影响[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
2 王月影;王艳玲;张岚;江青东;朱河水;韩立强;;不同发育期大鼠乳腺组织中Leptin的表达[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
3 王月影;王艳玲;杨国宇;李宏基;江青东;郭豫杰;鲁维飞;;不同发育期大鼠乳腺组织中孕酮受体的表达[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
4 王月影;杨国宇;王艳玲;江青东;郭豫杰;鲁维飞;;不同发育期大鼠乳腺组织中ERα的表达[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
5 章文正;彭伟;周卫红;曾宗浩;Mark Bartlam;饶子和;;人甲状腺激素应答蛋白THRSP的晶体学研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
6 林妮;吕俊华;潘竞锵;肖柳英;;荔枝核抑制乳腺增生大鼠乳腺组织ER和PR表达及促进细胞凋亡作用[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
7 赵志力;隋志甫;李蠡;石成方;谷廷敏;杨蓉娅;;脂肪抽吸联合腺体去除在男性乳房肥大治疗中的应用[A];美丽人生 和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛论文汇编[C];2010年
8 王月影;王艳玲;杨国宇;李宏基;朱河水;韩立强;;不同发育期大鼠乳腺组织中生长激素受体的表达[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
9 李萌;李庆章;;奶山羊乳腺中瘦素及其受体的表达与作用[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
10 宋武战;袁荣国;赵继华;;乳腺密度、年龄和更年期状态对正常乳腺摄取~(18)F-FDG的影响[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韩雪峰;西农萨能奶山羊乳腺cDNA文库构建和LPL基因的克隆与序列分析[D];西北农林科技大学;2007年
2 唐勇;猪伪狂犬病鉴别诊断研究与猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组序列的测定[D];华中农业大学;2004年
3 王颖;人参叶和根cDNA文库构建及表达序列标签分析[D];东北师范大学;2007年
4 柳淑芳;小尾寒羊多胎性状相关基因的鉴定和遗传研究[D];山东农业大学;2004年
5 陈晓红;慢性肝病患者组织cDNA文库的构建及用SEREX方法筛选HCC抗原[D];浙江大学;2005年
6 王海鸿;B型烟粉虱热休克蛋白基因的克隆和表达及其与胁迫耐受性关系的研究[D];中国农业科学院;2005年
7 白文涛;汉坦病毒受体的筛选及鉴定[D];第四军医大学;2005年
8 陈娟;可卡因安非他明调节转录肽相互作用蛋白的筛选[D];第二军医大学;2005年
9 余建秋;大熊猫基因资源库构建及粪便高质量DNA提取方法的建立[D];浙江大学;2006年
10 于丽;金黄地鼠神经管cDNA文库的构建及高温致畸相关基因的筛选[D];山东大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵耀儒;墨胸胡蜂毒腺基因cDNA文库的构建[D];武汉大学;2004年
2 温钢;小鼠嗅球cDNA文库的构建[D];东北师范大学;2006年
3 王志成;棉花与膜结合的内切-1,4-β-葡聚糖酶基因的克隆及序列特征分析[D];湖南农业大学;2004年
4 范维江;大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)下丘脑cDNA 文库的构建[D];四川农业大学;2004年
5 屠小卿;自身免疫性肝病靶抗原的筛选、表达、临床应用[D];第二军医大学;2003年
6 孙小洁;甜菜夜蛾cDNA文库的构建及几丁质合成酶基因片段的克隆[D];四川农业大学;2005年
7 朱彬彬;家蝇触角cDNA文库的构建及气味结合蛋白基因cDNA的克隆[D];华中农业大学;2005年
8 李晓进;云南个旧肺腺癌细胞株GLC-82 cDNA文库的构建和鉴定[D];昆明医学院;2005年
9 乌慧玲;稻褐飞虱不同生物型的荧光差异显示[D];南京师范大学;2004年
10 范一民;树干毕赤酵母cDNA文库构建及EST序列测定[D];南京林业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;针刺对乳腺组织影像和血流动力有影响[N];中国中医药报;2005年
2 曾兰(研究生);乳腺纤维瘤的中医治疗和自查[N];上海中医药报;2006年
3 白毅;我国科学家发现新型雷洛昔芬衍生物[N];中国医药报;2007年
4 本报记者 彭芸;内分泌治疗有望告别乳腺癌复发[N];中国妇女报;2010年
5 本报记者 衣晓峰靳万庆 通讯员 金鸥 刘宇;男性也应注意乳腺自查[N];中国中医药报;2007年
6 河北医科大学第四医院癌检诊中心主任医师 刘鹿宁;丰乳隆胸应慎行 美丽背后藏风险[N];河北日报;2006年
7 是明启;副乳腺怎样治疗[N];大众卫生报;2006年
8 北京友谊医院主任医师 王润华;副乳会癌变吗[N];中国医药报;2006年
9 陶宗令;喜忧参半话隆胸[N];中国医药报;2004年
10 副主任医师 张凤敏;做女人“挺”美吗[N];保健时报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978