收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶抗烟草花叶病毒活性及其酶学性质的初步研究

王伟伟  
【摘要】: 碱性蛋白酶(Alkaline Protease)是指在pH为碱性的条件下水解蛋白质肽键的酶类,是一种广谱性的蛋白水解酶,且来源广泛。由微生物法获得碱性蛋白酶成本低、产量高,方法科学可行。本研究旨在利用碱性蛋白酶降解烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白从而达到防治烟草花叶病的目的,为植物病毒病的防治提供一条崭新而有效的途径。论文从产碱性蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选、碱性蛋白酶的分离纯化、碱性蛋白酶抗TMV活性及其酶学性质等方面进行研究,主要研究结果如下: (1)从实验室已保存的4株枯草芽孢杆菌中,筛选出一株产高活性碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W-QX-1。 (2)对菌株的发酵条件进行了研究,分别试验了起始pH和装液量对发酵产酶的影响,绘制了发酵过程曲线。确定其最适发酵条件为:发酵起始pH为8.0,装液量为20mL/250mL,发酵周期为36h。 (3)菌株W-QX-1的发酵液经硫酸铵盐析、透析及非变性电泳分离得到纯的碱性蛋白酶,SDS-PAGE测得其相对分子质量为42400。 (4)采用半叶枯斑法在心叶烟上检测W-QX-1碱性蛋白酶抗TMV活性,发现该酶对TMV具有明显的体外钝化作用,酶液浓度为20mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L时,其钝化效果分别达到45.20%、53.40%、60.42%和76.73%;该酶对TMV的初侵染和体内复制增殖具有一定的抑制能力,实验结果表明在TMV侵染前24h施用浓度为200mg/L碱性蛋白酶液抑制其侵染力的效果达到50.35%,而在TMV侵染后施用也具有一定的抑制其复制增殖的作用,但效果并不明显。 (5)以酪蛋白为底物,对菌株W-QX-1产碱性蛋白酶酶学性质进行了研究。该酶的最适作用温度为50℃左右,在硼酸-硼砂缓冲液中的最适作用pH为7.8,在Tris-HCl缓冲液中的最适作用pH为8.0,在pH6~10范围内,45℃以下酶的稳定性较好。Ca~(2+)、K~+、Mg~(2+)对酶都有一定的激活作用,而Cu~(2+)、Ag~+则能抑制酶活;EDTA对该酶显示出较强的抑制作用,而SDS对该酶有明显的激活作用。 (6)枯草芽孢杆菌W-QX-1产碱性蛋白酶可以降解多种蛋白底物,其中对干酪素的降解能力最强,对可溶性丝素、明胶、牛血清白蛋白和精炼丝素也均有不同程度的降解,是一种广谱性的蛋白水解酶。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 郭发祥;肖金松;;枯草芽孢杆菌在家禽生产中应用[J];广东饲料;2011年07期
2 张超;单安山;;枯草芽孢杆菌在畜禽生产中的应用[J];饲料研究;2011年09期
3 梁晓梅;黎明;成堃;贾红红;路福平;;大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的构建及碱性蛋白酶的表达[J];生物技术通报;2011年06期
4 ;枯草芽孢杆菌在水产养殖中的应用[J];渔业致富指南;2011年17期
5 梁晋琼;;采用枯草芽孢杆菌活菌制剂预防和治疗仔猪细菌性腹泻的研究[J];农业技术与装备;2011年11期
6 孙爱杰;孙本风;赵纯洁;;紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应研究[J];中国乳品工业;2011年07期
7 许云贺;苏玉虹;田玉民;张莉力;;猪源芽孢杆菌的筛选、鉴定和产酶能力[J];饲料研究;2011年08期
8 王君;韩静;;大蒜汁对枯草芽孢杆菌芽孢形成和发芽的影响[J];山西农业大学学报(自然科学版);2011年03期
9 朱新鹏;;碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白质工艺的研究[J];保鲜与加工;2011年04期
10 高永生;朱丽云;朱贵州;费瑶;章宇星;;枯草芽孢杆菌产酶规律及酶学性质研究[J];安徽农业科学;2011年19期
11 徐后国;艾庆辉;麦康森;徐玮;刘付志国;;饲料中添加枯草芽孢杆菌和壳寡糖对大黄鱼幼鱼血清免疫指标的影响[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2011年Z2期
12 回云静;吴长宝;徐小明;蔡金艳;朱峰;任跃英;;枯草芽孢杆菌生物菌剂对五味子白粉病防效及生长的影响[J];菌物研究;2011年02期
13 赵新林;赵思峰;;枯草芽孢杆菌对植物病害生物防治的作用机理[J];湖北农业科学;2011年15期
14 钟啸萍;熊智强;陈小龙;;枯草芽孢杆菌a1所产抗真菌活性物质的稳定性研究[J];浙江农业科学;2011年04期
15 王培培;郭庆港;李社增;鹿秀云;李宝庆;张莉萍;马平;董金皋;;枯草芽孢杆菌NCD-2菌株的高效电击转化[J];中国生物防治学报;2011年03期
16 贾书娟;曾大兴;吴小丽;涂国全;;枯草芽孢杆菌C-D6抗菌蛋白对稻瘟病菌的抑菌作用[J];中国生物防治学报;2011年03期
17 马长中;辜雪冬;罗章;杨林;田广搂;唐记霞;;西藏产弹性蛋白酶的枯草芽孢杆菌分离及鉴定[J];安徽农业科学;2011年24期
18 詹寿年;吴拥军;郭倩倩;卢彪;;高活性谷氨酰胺酶豆豉芽孢杆菌的筛选及glsA基因的克隆[J];贵州农业科学;2011年06期
19 张庆花;王学东;;碱性蛋白酶对麦胚蛋白水解作用的研究[J];粮食科技与经济;2011年04期
20 叶小兰;李鹏成;杨倩;;枯草芽孢杆菌拮抗病原菌对细胞微丝的影响[J];畜牧兽医学报;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李美菊;陈向东;王小娟;耿晶;梅运军;王金晶;张扬;沈萍;;枯草芽孢杆菌培养液中DNA和DNase的检测及其分泌规律的研究[A];湖北省生物工程学会2004年年会学术报告及论文摘要汇编[C];2004年
2 李美菊;王小娟;张扬;陈向东;沈萍;;枯草芽孢杆菌重组菌株的DNA释放及其表达产物分泌的研究[A];湖北省遗传学会、江西省遗传学会2006年学术年会暨学术讨论会论文摘要集[C];2006年
3 刘桂君;孟佑婷;杨素玲;尚宏忠;;生防菌枯草芽孢杆菌的辐射诱变研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
4 蒋思婧;马立新;;枯草芽孢杆菌的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
5 李华;沈立荣;冯凤琴;李铎;;细菌型豆豉发酵菌株的鉴定[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
6 杨明明;;枯草芽孢杆菌高效表达系统的构建[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
7 钟娟;周金燕;李志东;雷宝良;谭红;;一种新型抗菌肽——捷安肽素的研究[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年
8 游银伟;尤升波;岳寿松;;枯草芽孢杆菌YYW-1蛋白酶缺陷株诱变与筛选[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
9 亓雪晨;齐俊生;王琦;梅汝鸿;;枯草芽孢杆菌启动子片段的克隆及其在绿色荧光蛋白标记中的应用[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
10 刘辉;魏祥法;井庆川;刘雪兰;刘瑞亭;石天虹;;一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李美菊;产蛋白酶工程菌株的构建及其释放DNA的研究[D];武汉大学;2005年
2 王海燕;脱毛蛋白酶产生菌的选育及其碱性蛋白酶基因的克隆与表达[D];四川大学;2006年
3 齐东梅;药食源芽孢杆菌的分类鉴定及枯草芽孢杆菌H110抑菌特性研究[D];中国农业大学;2005年
4 姚大伟;短小芽孢杆菌碱性蛋白酶酶学特性及其酶基因克隆、表达的研究[D];南京农业大学;2010年
5 黄庆;脱毛蛋白酶的纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2003年
6 王帅;芽孢杆菌及其脂肽类化合物防治植物病害和促进植物生长的研究[D];南京农业大学;2009年
7 张清霞;甘露寡糖诱导抗病反应初步研究及枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因的克隆与表达[D];中国农业大学;2005年
8 彭华;纳豆枯草芽孢杆菌对奶牛生产性能、瘤胃发酵和血液指标的影响[D];中国农业科学院;2011年
9 刘楠;苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶纯化、性质研究及其mel基因的克隆和表达[D];武汉大学;2004年
10 刘永锋;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs-916胞外抗菌蛋白质的纯化及其鉴定[D];南京农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王伟伟;枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶抗烟草花叶病毒活性及其酶学性质的初步研究[D];西北农林科技大学;2008年
2 李林珂;蛋白酶产生菌的筛选及其ap基因的克隆和表达[D];河南农业大学;2006年
3 敬蔚然;碱性蛋白酶产生条件和酶学性质及其基因克隆的研究[D];郑州大学;2010年
4 徐晶;弹性蛋白酶发酵生产条件优化及性质研究[D];东北农业大学;2008年
5 石岩;欧文氏杆菌突变体的构建及枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因的克隆和表达[D];中国农业科学院;2010年
6 吴宝昌;枯草芽孢杆菌混合发酵制备豆粕饲料的研究[D];山东轻工业学院;2010年
7 徐广军;枯草芽孢杆菌BS_(3-1)对小麦赤霉病(Fusarium graminearum)的生物防治研究[D];四川农业大学;2003年
8 莫宏春;枯草芽孢杆菌6-磷酸葡萄糖脱氢酶的分离纯化和部分性质[D];四川大学;2003年
9 邹立扣;枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因在大肠杆菌中的表达及玉米表达载体的构建[D];四川农业大学;2004年
10 周红梅;生防枯草芽孢杆菌mRNA差异显示分析[D];黑龙江大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;浅谈枯草芽孢杆菌在水产养殖上的应用[N];中国海洋报;2003年
2 江苏省淡水水产研究所研究员 徐在宽 江苏省海洋与渔业局工程师 仇丽;复合型枯草芽孢杆菌活菌生物净水剂在特种水产养殖中的应用探讨[N];科技日报;2001年
3 本报记者 仇方迎;还水体以清新[N];科技日报;2001年
4 河北远征药业 赵茂华王东军;早期仔猪断奶后常见问题及对策⑤[N];河北农民报;2007年
5 水清;活菌剂在农业生产上的应用[N];江苏农业科技报;2008年
6 ;蛋白酶[N];中国畜牧兽医报;2008年
7 香红星;走进微生物世界让这个“小精灵”为你增效[N];中国畜牧兽医报;2007年
8 王化民 本报记者  张会斌;法库创出服务农民新模式[N];辽宁日报;2006年
9 中国科学院亚热带农业生态研究所研究员 邢廷铣;水产动物微生态制剂及其应用(上)[N];湖南科技报;2008年
10 潘康成杨汉博;饲用芽孢菌作用机理的研究应用[N];中国畜牧兽医报;2008年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978