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侵染醴肠的双生病毒及其伴随的DNAβ的分子鉴定

韩芳  
【摘要】: 双生病毒是植物病毒中唯一的一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒(single stranded DNA, ssDNA),双生病毒可侵染双子叶和单子叶植物,且在田间通常为复合侵染,导致作物大范围受害。该病毒一般发生在热带、亚热带地区,温带地区也有发生。在我国的云南、广西、广东、海南等省的番茄、南瓜和番木瓜等多种重要作物上都发现了双生病毒的危害,有的甚至是毁灭性的危害。 本文利用双生病毒的简并引物PA和PB,对福建省福州和龙岩两地的杂草醴肠(Eclipta prostrate)进行PCR检测,结果均检测到了双生病毒。经测序,检测到的F30和F31两分离物均为空心莲子草黄脉病毒(Alternanthera yellow vein virus, AlYVV)的分离物。对两分离物DNA-A的全序列分析表明:F30及F31基因组DNA-A核酸序列相似性为96.4%。两分离物与亚洲报道的粉虱传双生病毒的基因组相似性较高,而与非洲、地中海地区报道的双生病毒相似性较低。F30与其它双生病毒比较得:其全基因组DNA-A与空心莲子草黄脉病毒(AlYVV)同源性最高,为96.4%;IR区与AlYVV-[Hn51]最为相似,具有90.3%的同源性。其4个ORFs编码的氨基酸序列与AlYVV、AlYVV-[PT1]、AlYVV-[Zin]和AlYVV-[G38]分别具有最高的同源性。应用扩增DNAβ分子的通用引物对F30和F31进行PCR扩增,结果在F30中得到一个DNAβ分子(F30β)。全序列测定分析表明:F30β全长1350nt,其互补链编码1个13.7kDa的βC1蛋白;其全序列与番茄曲叶病毒F09分离物相伴随的DNAβ(Tomato leaf curl virus-[F09], ToLCV-F09β)同源性最高,达96.7%;βC1编码的氨基酸序列与ToLCV-F09β和ToLCVβ最为相似。通过分离物F30 DNA-A和DNAβ的序列分析结果可推测,福建省醴肠杂草上可能存在空心莲子草黄脉病毒(AlYVV)和番茄曲叶病毒(ToLCV)的混合侵染。 我们利用双生病毒的传毒介体烟粉虱(Bemisia tabaci),对F30分离物进行了生物学传毒试验,接种后植物的Southern blot检测结果和PCR扩增结果均证明了F30能够通过烟粉虱侵染其它植物。本文同时构建了F30分离物DNA-A的侵染性克隆,为深入研究DNA-A和DNAβ在病毒致病过程中的作用打下基础。


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