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羧基磁性微球检测急性心肌梗塞早期标志蛋白的研究

王强  
【摘要】: 随着纳米技术的迅速发展,新型纳米材料被逐渐应用于生物科学领域,为其研究和发展提供了新的技术和手段。免疫磁性微球(Immunomagnetic Microspheres, IMMS)技术,就是将纳米磁性微球作为固相载体应用于免疫分析试验中,由于纳米磁性微球体积小、比表面积大以及分散稳定性好,使得其表面包被的抗原或抗体较多,整个反应体系类似在均相中进行,加大了抗原抗体接触机率,加速了抗原抗体复合物的形成,从而提高了检测的灵敏度。本研究以羧基磁性微球为固相载体,采用双抗体夹心荧光免疫分析方法,对急性心肌梗塞(Acute Myocardial Infarction, AMI)早期标志蛋白——脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和肌红蛋白(Myo)进行了半定量检测,从而建立了一种基于羧基磁性微球的新型荧光免疫分析方法。该方法特异性强、灵敏度高、耗时短,为今后疾病标志物检测和临床诊断提供了一种新的模型。本研究的具体内容和结果包括: 1.首先采用化学共沉淀法制备了油酸钠改性的纳米Fe_3O_4磁性粒子,然后以纳米Fe_3O_4磁性粒子为磁核,以苯乙烯、丙烯酸和二乙烯基苯为聚合单体,采用分散聚合法制备了羧基磁性高分子微球。利用透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、X-射线衍射仪(XRD)、振动样品磁强计(VSM)傅里叶变换红外光谱仪(FITC)、原子吸收分光光度计等对其进行了表征。结果表明纳米Fe_3O_4磁性粒子粒径在8~15 nm,分散性好,具有超顺磁性,饱和磁强度为48 emu/g。羧基磁性高分子微球平均粒径为1.7μm,粒径范围在0.19~3.50μm,具有超顺磁性,比饱和磁化强度为13.0 emu/g,磁含量为17.85%,羧基含量达0.386 mmol/g。 2.成功地进行了捕获抗体Anti-FABP10E1/Anti-Myo7C3与羧基微球连接,2.5 h后抗体吸附量分别达到最大值42.5和41.7 mg antibody/g;按照FITC试剂盒说明对检测抗体Anti-Myo-4E2/ Anti-FABP-9F3进行荧光标记;最后采用新型双抗体夹心免疫荧光分析法对AMI早期标志蛋白——Myo和H-FABP进行了检测,通过激光共聚焦显微镜对试验结果进行分析,并利用荧光分光光度计测定该方法的特异性。


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1 陈柯;吡虫啉对小鼠神经细胞的毒性研究[D];中国地质大学;2012年
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