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苹果蠹蛾颗粒体病毒张掖株(CypoGV-zy)的分离与鉴定

刘强  
【摘要】: 本文报道了分离自甘肃张掖的苹果蠹蛾颗粒体病毒张掖株Cydia pomonella granulovirus Zhangye isolate (CypoGV-zy)的分离与鉴定。对其进行了形态学鉴定,分子生物学鉴定以及利用Granulin氨基酸序列,绘制了GV的系统发育树。 1.用纯化后的病毒感染苹果蠹蛾3龄幼虫,使用透射电子显微镜观察发病幼虫脂肪体细胞,发现大量出芽病毒。CypoGV-zy颗粒体大小在500nm左右,呈椭圆形。该病毒为单粒包埋型,囊膜内仅有一个病毒粒子。病毒粒子呈杆状,长250nm左右,由一个杆状核衣壳被包组成。CypoGV-zy的病毒特征与颗粒体病毒(GV)相符合,为颗粒体病毒,完成了形态鉴定。 2.依据已公布的CypoGV颗粒体蛋白(granulin)基因设计引物,利用PCR技术,得到了CypoGV-zy的颗粒体蛋白基因,测序之后,与CypoGV已知的granulin基因进行比对,发现与CypoGV的granulin基因序列完全相同,确定了CypoGV-zy为CypoGV的张掖分离株,从而完成了对CypoGV-zy的分子鉴定。测序得到的CypoGV-zy的颗粒体蛋白基因,为利用颗粒体蛋白氨基酸序列对CypoGV-zy进行进化分析提供了基础。 3.应用软件ClustalW,根据杆状病毒包涵体蛋白氨基酸序列对CypoGV-zy的granulin进行了系统发育分析,分析范围包括61种NPV的Polyhedrin氨基酸序列和18种GV的Granulin氨基酸序列。氨基酸序列多重联配分析结果表明:CypoGV-zy的包涵体蛋白与其它所有的GV之间的相似性很高,在85-97%之间,而与NPV的相似性在52-56%之间,其中与Neodiprion属昆虫的三种NPV相似性只有36-37%之间,表明这3种NPV在进化上与其他杆状病毒亲缘关系较远。


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