收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

小麦类脱水素基因wzy2的克隆及在毕赤酵母中的功能分析

朱维宁  
【摘要】: 脱水素(dehydrins,Dhns)是属于LEA-Ⅱ蛋白家族,分子质量范围为9~200kD,广泛存在于高等植物中的干旱诱导蛋白,在种子成熟的脱水耐受过程中发挥重要作用。在当植物组织处于干旱、盐等逆境情况下或种子成熟时,脱水素就会大量积累。脱水蛋白是植物对干旱胁迫的一种适应性的保护反应。脱水蛋白结构特征决定了其在保护细胞生物膜和蛋白质结构的完整性和稳定性方面具有重要作用。 本研究以郑引1#小麦为材料,根据本实验室已得到的脱水素基因序列,设计引物Fw1/Aw2,进行小麦脱水素基因wzy2 cDNA全长序列的克隆,并转化到真核生物酵母中表达,揭示小麦类脱水素基因表达与其抗逆性的关系,进而为这类基因在逆境胁迫下的调控机制及其诱导转录因子等深入研究奠定基础。 通过以上研究,取得以下主要结果: 1.从郑引1#小麦中获得脱水素基因wzy2 cDNA全长序列,该基因全长为819bp,其含有1个459bp开放阅读框(ORF),编码152个氨基酸,其编码的蛋白具有类脱水素结构典型特征(K片断),由1个Y片段、1个S片段和2个K片段组成,属于YSK2型类脱水素。 2.利用生物信息学软件对小麦脱水素基因wzy2编码的蛋白序列进行分析,可知该蛋白是一种中性蛋白质,分子量为15.5kDa,等电点pI为7.17;该蛋白缺少半胱氨酸(Cys)和色氨酸(Trp),富含甘氨酸(Gly)、苏氨酸(Thr)、赖氨酸(Lys)、谷氨酰胺(Gln)和组氨酸(His)等亲水性极性氨基酸;二级结构预测结果表明:该编码蛋白存在跨膜域,可能是脱水素K片段形成的兼亲性α-螺旋与部分蛋白质及膜脂结合,束缚细胞中游离水,稳定细胞膜结构。 3.通过载体构建、电转化及筛选(依次为:His+、G418)鉴定获得了含有wzy2的毕赤酵母GS115阳性重组菌;用甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定,进一步证实了该基因已成功转入毕赤酵母GS115中,并获得了高效特异分泌表达。 4.对转wzy2基因的毕赤酵母GS115重组子分别进行耐旱性及冰冻耐受性分析,当NaCl高于0.8mol/L,山梨醇高于1.6mol/L时,wzy2基因能显著提高转基因酵母在盐和干旱胁迫条件下的生长情况,而在低温胁迫条件下,转wzy2的酵母细胞存活率为37.83%±9.26%,转空载体pPIC9K的酵母细胞存活率为32.85%±6.33%,二者细胞存活率差异性不显著。进一步证明了YnSK2型脱水素可被干旱胁迫诱导,而不被低温诱导。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张冬梅,潘卫庆,陆德如;恶性疟裂殖子表面蛋白1合成基因在毕赤酵母中的表达[J];生物工程学报;2000年06期
2 冮宏映,李洪钊;一种获取巴斯德毕赤酵母高拷贝重组子的新方法[J];生物技术;2003年02期
3 杨梦华,李颖,关国华,江正强;极端耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的高效表达[J];微生物学报;2005年02期
4 李洪淼;王红宁;许钦坤;;重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达植酸酶[J];中国生物工程杂志;2005年S1期
5 杨莉莉;贺巾超;马杰;范伟全;王建秋;魏传宇;颜浩为;颜炜群;;PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中引导分泌表达天然N-端rBPTI[J];吉林大学学报(医学版);2005年06期
6 董杜鹃;扈进冬;张新昌;李子劲;王金星;赵小凡;;棉铃虫组织蛋白酶B酶原在毕赤酵母中的表达[J];中国生物工程杂志;2006年02期
7 乔宇;陈小兵;丁宏标;岳明;;甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究[J];中国生物工程杂志;2006年07期
8 王隆飞;方园园;陈功;博涛;侯健华;杨少辉;李桂兰;李欣;李明刚;;产人胰岛素毕赤酵母工程菌的构建[J];南开大学学报(自然科学版);2006年05期
9 丁镌;宋跃芬;袁野;刘娣;;毕赤酵母表达外源基因存在的问题与对策[J];畜牧与兽医;2007年02期
10 徐煌;韩冬;王芳;钟辉;周秋丽;颜炜群;;人热休克蛋白110在毕赤酵母中的表达及鉴定[J];中国老年学杂志;2007年08期
11 陆建荣;王惠民;凌勇武;黄松平;常秋月;;人源多肽抗生素LL-37真核表达载体的构建[J];临床检验杂志;2007年03期
12 黄义德;林玮;蔡燕惠;张彦定;;重组人骨形态发生蛋白4在毕赤酵母中的表达研究[J];福建师范大学学报(自然科学版);2007年05期
13 邢克飞;吴琳;李燕;刘新平;药立波;李福洋;;靶向性DNA甲基化酶在毕赤酵母中的表达和鉴定[J];生物技术通讯;2007年05期
14 张云霞;丁银巧;赵铁柱;杨璐;孙明;曹振;王传彬;陈西钊;田克恭;;犬细小病毒VP2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[J];中国比较医学杂志;2007年12期
15 孔宁;牟旭鹏;韩冬;马杰;陈伟莉;颜炜群;;人抑瘤素M在毕赤酵母中的高效分泌表达[J];吉林大学学报(医学版);2008年01期
16 胡乔;赵凌侠;唐克轩;;在毕赤酵母中表达人溶菌酶蛋白的研究[J];上海交通大学学报(农业科学版);2008年03期
17 徐煌;韩冬;董波;关铭;颜炜群;;重组人HER2/neu ICD在毕赤酵母中的表达及鉴定[J];中国老年学杂志;2008年24期
18 孙爱萍;谌晓华;贾伟;万红贵;;毕赤酵母摇瓶产木聚糖酶发酵条件的优化[J];江西化工;2009年01期
19 苏曼曼;陈月;王文佳;许天敏;常伟勤;颜炜群;包晓群;;重组人载脂蛋白E3在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定[J];中国老年学杂志;2009年07期
20 陈彦球;魏明旭;张磊;杨燕;;mNUDC基因在巴斯德毕赤酵母中表达载体的构建及表达[J];现代生物医学进展;2009年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 仝光杰;楼觉人;;HPV52 L1蛋白在毕赤酵母中的优化表达[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
2 金光泽;段作营;张莲芬;金坚;李华钟;;重组融合人血清白蛋白/人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 崔栩;曹云鹤;;两种β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 周宇飞;袁汉英;吕红;;人超氧化物歧化酶-胸腺素α1在毕赤酵母中的表达、纯化与活性检测[A];2012年中国青年遗传学家论坛会议文集[C];2012年
5 傅小强;吴少庭;黄汉菊;刘洪波;;结核杆菌ESAT-6基因在毕赤酵母中表达及其鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
6 王宏伟;金宁一;;抗HIV—1gp120单链抗体基因的克隆及其在毕赤酵母系统中的表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
7 汤丹;刘松财;史勇;李莉;张英;郝林琳;;甜味蛋白Brazzein在毕赤酵母中的表达[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
8 苏曼曼;许天敏;王毅;宿晓云;颜炜群;;重组人载脂蛋白E3在毕赤酵母中的表达与鉴定[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
9 廖娟;王红宁;田浪;阳泰;张毅;;禽传染性支气管炎病毒M基因在毕赤酵母中表达与蛋白反应活性检测[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
10 刘高科;何莉;杨永涛;汪正清;;人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 卢忠民;IL-18 RGD模体的构建及生物活性的研究[D];大连医科大学;2005年
2 刘堰;重组人白介素-2(IL—2)突变体克隆及在巴斯德毕赤酵母系统中的表达与纯化[D];重庆大学;2002年
3 马杰;人HSP70在毕赤酵母中的表达鉴定及大规模发酵和纯化工艺研究[D];吉林大学;2005年
4 万榕;蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)抗黑色素瘤细胞侵袭与转移的作用[D];福建医科大学;2005年
5 杨莉莉;重组牛胰蛋白酶抑制剂的研究[D];吉林大学;2006年
6 王海燕;荧光假单孢菌脂肪酶基因的克隆、改造及其在毕赤酵母中的表达[D];中国农业科学院;2006年
7 陈伟莉;重组人TRAIL的制备和抗肿瘤作用的研究[D];吉林大学;2007年
8 高敏杰;基于智能工程和代谢调控的毕赤酵母发酵过程控制研究[D];江南大学;2012年
9 吴丽娟;重组人A20的分子设计及酵母表达研究[D];重庆医科大学;2004年
10 樊建勇;人源性抗角蛋白抗体的高效表达及其作用研究[D];第四军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱维宁;小麦类脱水素基因wzy2的克隆及在毕赤酵母中的功能分析[D];西北农林科技大学;2010年
2 牛超;重组人弹力素大规模发酵工艺的优化[D];吉林大学;2010年
3 翟立公;Spinigerin a抗菌肽基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];吉林农业大学;2011年
4 李洋;重组人FGF-2的制备及活性研究[D];吉林大学;2010年
5 陈丽;多拷贝毕赤酵母重组菌表达PIP生理特性和动力学研究[D];华东理工大学;2011年
6 王少然;二硫键对菌丝霉素抗菌活性的影响及菌丝霉素聚体在毕赤酵母中的表达[D];中国农业科学院;2011年
7 李昆鹏;重组猪生长素基因工程菌培养基优化及高密度液体发酵研究[D];兰州理工大学;2011年
8 吴殿君;重组奶牛神经肽Y基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性分析[D];吉林大学;2011年
9 刘琨;酵母Bir1p同源物Survivin对毕赤酵母的分子重组与生长影响[D];华东理工大学;2010年
10 王志强;内切葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母GS115中的表达[D];郑州大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者  范建;毕赤酵母能“吃掉”多种有机磷农药[N];科技日报;2006年
2 ;基因科学的耕耘者[N];上海科技报;2008年
3 董丹 刘昱辉 吴元华;基因工程生产降钙素研究方兴未艾[N];中国医药报;2007年
4 丛秀明;有机磷农药降解酶制剂制成[N];中国化工报;2006年
5 戴炳仁;我国发明果蔬迅速脱毒生物技术[N];中国国门时报;2006年
6 刘晴;有机磷农药降解酶制剂[N];农村医药报(汉);2006年
7 记者 陈卫东;我破解基因工程产业化难题[N];科技日报;2007年
8 周铮;我国研制成功"有机磷农药降解酶制剂"[N];农民日报;2006年
9 记者 朱永坤;有机磷农药降解酶研制步入工业化[N];农资导报;2007年
10 王春;观念创新对接纽带[N];科技日报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978