火棘内生真菌的分离及其抑菌活性研究

【摘要】： 植物内生真菌(endophytic fungi)是指生存于健康植株根、茎、叶、果内部,对宿主植物不形成病理侵害或尚未形成明显侵染的一类真菌。植物与其内生真菌互惠共生,植物为内生真菌生存提供光合产物和必需的矿物质、内生真菌次生代谢产物直接刺激或间接有利于植物生长发育,从而改善宿主植物对生物胁迫或非生物胁迫的抗逆性。 从蔷薇科植物火棘茎、叶、果中分离出内生真菌15株,其中茎中分离得到4株(S1-S4)、叶中8株(L1-L8)、果实中3株(F1-F3);用9种植物主要常见病害病原菌(烟草赤星病菌、苹果炭疽病菌、小麦赤霉病菌等)作为靶标菌,检测火棘内生真菌次生代谢产物的抑菌活性,获得具较高抑菌活性的内生真菌S4。 以15株内生真菌为试验材料,经过液体摇床培养,将总培养物包括发酵液和菌丝体烘干研磨后用丙酮抽提,测定总培养物丙酮粗提液对9种植物病原真菌抑菌活性和毒力方程,对S4液体培养物化学成分进行定性检测。结果表明,15株内生真菌中,有抗菌活性菌株占86.67%。S4菌株液体培养物丙酮抽提物对9种供试病原真菌都表现出明显的抑菌活性,抑菌率均在50%以上,最高可达97.14%,且抗菌谱较广;菌株S1、S3、L1丙酮粗提液也具有较高的抑菌率。实验表明S4代谢产物的化学成分中可能含有还原糖、有机酸、黄酮、内酯、香豆素等成分。 通过对产生了显著抗菌活性代谢产物的内生真菌菌株(S4)进行分子鉴定,采用CTAB法提取基因组18S rDNA并进行PCR扩增、扩增产物纯化、序列测定等过程,结果表明S4菌株为子囊菌亚门间座菌属(Diaporthe)真菌。 火棘内生真菌S4的抑菌活性成分的结构还有待进一步研究。