收藏本站
收藏 | 论文排版

鸡Bcl10基因的克隆与表达

孙柏  
【摘要】: B细胞淋巴瘤因子10 (B cell lymphoma-10, Bcl10)是一种细胞凋亡调节因子,属于胞内蛋白。其N端13-101残基形成一个Caspase募集结构域(caspase recruitment domain,CARD),该CARD由6个紧密压缩的反平行的α-螺旋组成,类似于“死亡结构域(death domain, DD) ".它具有诱发细胞凋亡的功能,与Ⅱ型马疱疹病毒E10基因的一个区域有高度的同源性。Bcl10基因能在细菌LPS刺激下,参与LPS/TLR4途径引起NF-κB的活化。体外实验也发现,野生型Bcl10通过活化Caspase-9激活NF-κB信号通路。它还具有促使细胞成熟的功能,缺乏Bcl10基因的老鼠,虽然能制造正常数量的未成熟B细胞,但因缺乏Bcl10来活化NF-κB,导致细胞不会发育成熟。另外,Bcl10基因还与黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生发展有关。研究发现只有全长的Bcll0基因才具有这些功能。随着进一步的研究,发现一些蛋白与Bcl10蛋白组成复合物发挥作用,Bcl10基因的一些新的功能也被发现。小鼠的Bcl10基因在1999年被克隆出来,猪的Bcl10基因也在2008年通过克隆得到。为研究鸡Bcl10基因的功能,我们以人的Bcl10基因为种子序列,通过电子克隆方法,得到了一条长度为959bp的序列。通过生物信息学分析,构建原核表达载体和真核表达载体,初步研究了鸡Bcl10基因在大肠杆菌和Vero细胞中的表达。得到了以下结果: (1)本试验以人的Bcl10基因为种子序列,用电子克隆的方法得到了一条长959bp的序列,序列基本符合Kozak规则。通过分析发现它的ORF为735 bp,编码244个氨基酸,分子质量为27.1 ku。该基因定位于鸡的8号染色体上,确定存在3个外显子,外显子符合GTAG规则。该基因编码的蛋白不含有跨膜区,极可能是核内蛋白,含有疏水性氨基酸。本研究从鸡的脾脏提取了RNA, PCR扩增后连接T载体测序,测序结果发现与电子克隆结果存在2个碱基的差异,但未引起氨基酸的改变。 (2)以保存的PMDV-Bcl10质粒为模板,经PCR扩增,连接pET-32a载体,转化BCL21(DE3)感受态细胞。经质粒双酶切鉴定后测序,测序结果与分子克隆结果一致,证明原核表达载体PET-Bcl10构建成功。阳性菌液在IPTG浓度为0.1,0.3,0.5mmol/L,28℃条件下诱导6h,在47.5ku的位置上出现了目的条带,这证明Bcl10基因在大肠杆菌中得到了表达。 (3)以保存的PMDV-Bcl10质粒为模板,经PCR扩增,连接到pEGFP-C1载体,构建pEGFP-Bcl10重组质粒,重组质粒双酶切鉴定后送公司测序,测序结果显示与分子克隆结果一致,证明鸡Bcl10基因的真核表达质粒pEGFP-Bcl10成功构建。真核表达质粒pEGFP-Bcl10和pEGFP-C1质粒经脂质体转染法转染Vero细胞,48h后在荧光显微镜下发现有明显荧光,证明成功将真核表达质粒pEGFP-Bcl10和pEGFP-C1质粒转入Vero细胞。60h后从细胞中提取了蛋白,经Western Blot检测,转染pEGFP-Bcl10质粒的细胞组的在60Ku位置出现目的条带,转染pEGFP-C1质粒的细胞组在33ku出现目的条带,证明pEGFP-Bcl10质粒在Vero细胞中成功得到表达。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 郑兆鑫,贺沛富,严维耀,王启松,施文,赵洪兴,周智爱,朱慈晖,徐泉兴,陈嘉棣,李致勋,施履吉;编码口蹄疫病毒VP1免疫活性肽基因片段的化学合成及克隆与表达[J];病毒学报;1989年01期
2 邹民吉,王嘉玺,王利红,段聚宝,赵春文,蔡欣;肥胖基因的分离及其在大肠杆菌中的表达[J];生物化学与生物物理进展;2000年01期
3 褚明亮;陈创夫;刘君;曹旭东;;停乳链球菌MIG基因的克隆和原核表达[J];中国预防兽医学报;2008年06期
4 李本强;刘燕霏;徐军;杨建德;;猪胸膜肺炎放线杆菌整合膜蛋白基因的克隆与表达[J];黑龙江畜牧兽医;2010年07期
5 杨建德;刘燕霏;李本强;;马链球菌抗吞噬蛋白的鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;2010年17期
6 聂福平;李作生;邱薇;张富强;张连江;宋贵强;龙贵伟;廖金;任玉莹;余方芳;张泉鹏;王灵强;范泉水;;犬瘟热病毒Yunnan株H基因的克隆与表达[J];动物医学进展;2008年01期
7 郭伟生;吴哲;郭海勇;钱爱东;;抗菌肽的基因克隆表达及其在畜牧业中的应用前景[J];吉林畜牧兽医;2008年12期
8 莫小见,郭爱珍,陆承平;犬瘟热病毒南京株 H 蛋白基因的克隆与表达[J];中国病毒学;2004年05期
9 朱慧;王云霞;胡白石;刘凤权;;产酶溶杆菌OH11菌株α-水解蛋白酶基因的克隆与表达[J];中国生物防治;2007年04期
10 陈建国;苏兆亮;柳迎昭;戴晓莉;薛渊;王胜军;邵启祥;许化溪;;铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF基因的克隆与原核表达[J];现代预防医学;2009年05期
11 杨建德;刘燕霏;李本强;徐军;;猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因(OMP-1)的克隆、表达及其ELISA方法的建立[J];天津农学院学报;2009年03期
12 晋圣瑾,方肇寅,杭长寿,吴狄;A组轮状病毒SA11VP6基因的克隆和表达[J];病毒学报;1995年02期
13 王晓强,王刚,蔡佩玲,童英;血小板反应素-1活性片段的克隆与表达[J];四川大学学报(自然科学版);2005年05期
14 段学军,闵航,吕文平,夏颖;真养雷氏菌DKC1菌株镉抗性czcC基因的克隆与表达[J];微生物学报;2004年04期
15 罗福康,郑红,沈大斌;趋化因子MIP-3α的克隆与表达[J];局解手术学杂志;2005年02期
16 韦旭钦;韦宇拓;黄日波;;大肠杆菌yqhD基因的克隆与表达[J];广西农业生物科学;2005年04期
17 刘杰;杨建德;Timoney John;;马链球菌Se39.612蛋白的克隆与表达[J];中国预防兽医学报;2007年03期
18 董世雷;刘伟;朱立颖;王学琴;于宏伟;王欣;;大肠杆菌外膜蛋白酶基因OmpT的克隆及表达[J];中国农业科技导报;2011年02期
19 薛群;应向贤;杨池;汪钊;;荧光假单胞菌短链脱氢酶的克隆、表达及酶学性质分析[J];生物工程学报;2011年09期
20 李光涛,金鉴,周严,黄晓玮,周海军,胡松年,袁建刚,强伯勤;人神经系统特异表达基因HMP19cDNA的克隆与表达谱分析[J];云南大学学报(自然科学版);1999年S3期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曹威;栾颖;于波;;大鼠心肌细胞钙调磷酸酶Aβ基因的克隆与表达[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
2 孟庆玲;乔军;陈创夫;任艳;张辉;;单核细胞增生性李氏杆菌内化素J基因的克隆与表达研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 黄涛;;猪COX7c基因的克隆与表达谱分析[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
4 马均;何业华;曹莉;许文天;郭翠红;夏靖娴;陈程杰;;菠萝SERK基因的克隆与表达分析[A];中国园艺学会2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
5 宋鸿雁;严若峰;徐立新;宋小凯;李祥瑞;;堆型艾美耳球虫乳酸脱氢酶基因的克隆与表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
6 程军;董辉;郭涛;韩红玉;姜连连;赵其平;朱顺海;马卫娇;曾艳波;孔春林;李婷;黄兵;;柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M_(20)的克隆与表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
7 韩焕兴;陆慧琦;安峰;叶伟民;范列英;朱桦;曾万杰;罗荣城;;人源生物工程抗-HBsFab的克隆与表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
8 王超;刘巍峰;陈冠军;;Cytophaga hutchinsoniiα-异丙基苹果酸合酶基因的克隆与表达[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
9 刘海映;姜玉声;刘连为;;口虾蛄酚氧化酶原基因的克隆与表达分析[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
10 梁新峰;陈书明;;麻鸡IL-18成熟蛋白基因的克隆与表达[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘怡辰;烷烃的微生物降解及其羟化酶基因的克隆与表达[D];南京农业大学;2010年
2 肖荣;短乳杆菌M8菌株的筛选及其slpM基因的克隆与表达研究[D];湖南农业大学;2012年
3 李惠华;龙眼体胚发生过程中激素代谢和信号转导相关基因的克隆与表达[D];福建农林大学;2010年
4 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
5 任磊;牡丹花器官发育相关基因的克隆与表达[D];中国林业科学研究院;2011年
6 吕凤霞;内生多粘芽孢杆菌纤溶酶的纯化、性质及其基因的克隆与表达[D];南京农业大学;2009年
7 戴汉川;几种不同鱼类肥胖基因的克隆与鲤肥胖基因的表达研究[D];华中农业大学;2005年
8 张云霞;巴西橡胶树HbMyb1调控基因的克隆及表达[D];华南热带农业大学;2005年
9 孙海峰;枣花分生组织特异基因的克隆与表达分析[D];山西大学;2009年
10 郑洁红;龙眼叶片黄酮类物质生物合成关键基因的克隆与表达研究[D];福建农林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙柏;鸡Bcl10基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2010年
2 李翔;茄子花青素生物合成关键基因的克隆与表达分析[D];上海交通大学;2011年
3 刘雪;豆豉纤溶酶产生菌的筛选及基因的克隆与表达研究[D];山东师范大学;2011年
4 王友德;水稻纹枯病菌PG的分离纯化、理化性质及Rspg1基因的克隆与表达[D];扬州大学;2010年
5 刘巧林;三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)精氨酸酶和丝氨酸蛋白酶基因的克隆与表达[D];湖南农业大学;2010年
6 关鹏;四川蒙顶山苏云金芽胞杆菌cry基因鉴定及其新型模式cry基因的克隆与表达[D];四川农业大学;2010年
7 董捷;草鱼四个候选内参基因稳定性比较及两个免疫相关基因的克隆与表达研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 杨丽;嗜麦芽寡养单胞菌D2株碱性磷酸酶基因的克隆与表达[D];青岛大学;2010年
9 蔡欣;人白细胞介素22的克隆表达及功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
10 李潇;苜蓿MtERN1-3等结瘤素基因的克隆与表达载体构建[D];西南大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 刘海英;维生素D可直接影响人类229个基因的活性[N];科技日报;2010年
2 医学博士 科学松鼠会成员 致桦;美丽的干扰[N];中国经营报;2010年
3 记者 仇方迎;高校科技攻关一批成果快速投入防控[N];科技日报;2003年
4 陈英云 乔蕤琳 本报记者;哈医大新课题获国家重点资助[N];哈尔滨日报;2010年
5 实习生 程凤;美发现夜盲症基因的重要作用[N];科技日报;2011年
6 王志亮;监测疯牛病的哨兵[N];科技日报;2002年
7 本报记者 王建高 本报通讯员 刘世禄;青岛推进海洋酶工程产业化[N];科技日报;2001年
8 吴卫红 段文利 崔芳 整理;从不同视角看转化医学[N];健康报;2010年
9 任朝阳 李秉珅;基因检测与优生优育的关系[N];科技日报;2010年
10 张田勘;干细胞研究精彩纷呈[N];中国医药报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978