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二甲基甲酰胺与两种多糖对猪精液冷冻保存效果的研究

刘宏  
【摘要】: 猪精液冷冻保存技术是随着人工授精技术的广泛应用而逐渐发展起来的,但目前冻精用于猪人工授精的使用率不足1%。这主要是由于猪精子对降温非常敏感,冷冻解冻后异常精子数较多、精子活率及受精能力降低等。 为了进一步改善冷冻解冻后猪精液品质,本试验从渗透性和非渗透性冷冻保护剂以及卵黄三方面对稀释液进行改进,用二甲基甲酰胺(DMF)替代常规冷冻保护剂甘油,用鸽蛋卵黄替代传统的鸡蛋卵黄,并添加昆布多糖和丹参多糖,以冷冻解冻后精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整率、顶体完整率和DNA完整率等作为评价指标,利用计算机辅助精液分析系统(CASA)、碘化丙啶(PI)、罗丹明123、低渗肿胀试验(HOST)、异硫氰酸荧光素连接的花生凝集素(PITC-PNA)及单细胞凝胶电泳(SCGE)等对精子质量进行评估。研究DMF、两种多糖和鸽蛋卵黄对猪精液的冷冻保护作用,并且探讨了冷冻保护剂对猪精液冷冻前后SOD酶活力、总抗氧化能力(T-AOC)和精子胆固醇含量变化的影响。 本论文所得结果如下: 1.当DMF添加量为5%,4℃平衡时间为90 min时,解冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率和质膜完整率均显著高于3%甘油对照组(P0.05)。本试验结果表明DMF可以替代甘油用于猪精液冷冻保存,且能改善冷冻解冻后精液品质。 2.在常规冷冻基础液TCG中添加0.8mg/mL昆布多糖和0.4mg/mL丹参多糖可显著提高冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率、质膜完整率(P0.05),而且昆布多糖和丹参多糖能提供有效的抗氧化能力。 3.猪精液冷冻保存过程中,在常规冷冻基础液TCG中添加15%鸽蛋卵黄,冻后猪精子活率、顶体完整率、质膜完整率和DNA完整率均显著高于20%鸡蛋卵黄对照组(P0.05)。本试验结果表明鸽蛋卵黄可以替代鸡蛋卵黄用于猪精液冷冻保存,且取得了较好的冷冻保护效果。 4.在平衡后、解冻后,精子内SOD酶活力、总抗氧化能力(T-AOC)和胆固醇含量均有所下降。添加鸽蛋卵黄后,精子SOD酶活力、T-AOC和胆固醇含量均有所提高,15%鸽蛋卵黄组显著高于对照组(P0.05);5% DMF组SOD酶活力和T-AOC均显著提高(P0.05),但DMF对精子胆固醇含量影响不大;添加0.6~0.8mg/mL昆布多糖和0.4~0.6mg/mL丹参多糖后,精子SOD酶活力、T-AOC和胆固醇含量均显著提高(P0.05)。


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