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转染hTERT猪小肠上皮细胞株的建立和猪传染性胃肠炎病毒对其活性的影响

仝钢  
【摘要】: 小肠上皮细胞是一种良好的细胞模型,广泛应用于小肠功能和病原微生物致病机理的研究。小肠上皮细胞缺乏端粒酶活性,大约在体外培养十代,细胞就进入衰老期,不能继续传代培养。人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因作为端粒酶催化亚基,能通过阻止端粒的缩短而延长细胞生命周期。研究证实,多种细胞已经应用hTERT基因成功转导。我们分离培养了猪小肠上皮细胞(SIECs),进行了小肠上皮细胞hTERT转染的研究,并且开展了猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)对上皮细胞活性影响的研究,获得了以下结果: (1)无菌采取猪小肠,组织块法分离培养上皮细胞。培养的上皮细胞为单层贴壁生长,呈铺路石样,具有较强的增殖能力。细胞角蛋白18鉴定为阳性,结合细胞形态学观察,表明,分离的细胞为小肠上皮细胞。细胞生长活力好,在体外连续培养10代后,细胞生长停滞,上皮样特征消失。 (2)采用脂质体转染法,将编码pCI-neo-hTERT真核表达质粒导入原代培养的小肠上皮细胞。保持400μg/mL G418筛选,约15d后,得到抗G418阳性细胞群,转移至新皿,200μg/mL G418维持,扩大培养。RT-PCR检测到hTERT mRNA在转染细胞中的表达,说明外源性hTERT稳定转染入小肠上皮细胞。目前已传代培养10个月,传至80代。命名为转端粒酶猪小肠上皮细胞(hTERT-IECs)。 (3)取转染后第60代hTERT-IECs,待生长至70%单层时接种猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M12F2株,加维持液(含20 mL/L胎牛血清培养基)培养。同时设定阴性对照。检测接毒后24、48、72h的细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,同时检测盲传至第2代、5代细胞的细胞周期。结果表明,细胞形态未发生明显的变化,不引起明显的细胞病变。Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性降低,细胞周期发生变化,发生凋亡。 综上所述,本研究在成功分离培养SIECs的基础上,将人的端粒酶逆转录酶基因导入其中,延长了SIECs在体外培养的寿命,转染后的SIECs已经传代至80代。猪传染性胃肠炎病毒不能使细胞产生明显的病变,但是降低了细胞的活性,为猪传染性胃肠炎病毒的致病机理提供科学资料。


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16 刘芳宁;张彦明;;哺乳动物肠上皮细胞的原代培养[J];动物医学进展;2007年04期
17 陈正贤;猪呼吸道冠状病毒[J];中国动物检疫;1993年03期
18 吴国平,尹燕博,孙淑芳,郭福生,何后军,龚振华;RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒方法的建立[J];中国兽医杂志;2003年03期
19 陈芳,刘惠莉,孙红立,曹祥荣,李震,赵立平;多重RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒[J];中国兽医学报;2005年01期
20 李凯年;用位点杂交法检测组织中的TGEV和PRCV[J];畜牧兽医科技信息;1997年17期
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4 晶莹;芪龙胶囊通过鉴定[N];大众科技报;2001年
5 王振纲;他汀与葡萄柚[N];健康报;2003年
6 潘治;抗SARS药物研制开局良好[N];中国医药报;2003年
7 庄愉;改善蛋白质和多肽类药的胃肠吸收[N];中国医药报;2004年
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9 海南职业技术学院 王成林;猪群腹泻的防与治[N];中国畜牧兽医报;2009年
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