两株苦楝内生真菌混合发酵菌丝体的化学成分及生物活性研究

【摘要】： 苦楝内生菌因其可以产生多种具有抗菌、杀虫活性且与环境有很好的相容性的次生代谢产物,是研发天然药物的理想资源,在农业、医药卫生领域有着巨大的应用潜力;混合发酵因其能产生单株发酵所不能产生的效果,已成为微生物领域的研究热点。本文以苦楝内生真菌为研究对象,基于混合发酵的优点,对混合发酵菌丝体的化学成分进行了研究,旨在从中发掘新颖的,具有良好生物活性的天然产物,为进一步开发苦楝植物及其内生菌资源提供理论依据,主要取得了以下结果。 以两株苦楝内生真菌LN-14和LN-15为研究对象,在原有发酵条件下进行混合培养,对混合发酵的菌丝体乙酸乙酯提取物及其一级柱层析得到的8个组分(Fr.1~8)进行了苦楝素的含量检测,结果表明乙酸乙酯提取物中含有苦楝素,且经过硅胶柱层析粗分后主要集中在Fr.4和Fr.5中。 通过滤纸片法、抑制菌丝生长速率法和载毒叶片法对LN-14和LN-15混合发酵的菌丝体乙酸乙酯提取物及其一级柱层析后8个组分进行了抗细菌(大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和蜡状芽孢杆菌)、抗真菌(苹果炭疽菌、番茄灰霉菌、番茄早疫菌、西瓜枯萎菌、棉花枯萎菌、马铃薯干腐菌、玉米弯孢菌和小麦赤霉菌)和杀虫活性(三龄粘虫)测定,结果表明,菌丝体乙酸乙酯提取物具有一定的抗菌杀虫活性,一次柱层析后得到的Fr.4和Fr.5具有较好的抗菌活性,其中Fr.4对苹果炭疽菌、番茄灰霉菌、番茄早疫菌、西瓜枯萎菌、棉花枯萎菌、马铃薯干腐菌、玉米弯孢菌和小麦赤霉菌菌丝生长的半抑制浓度(IC50值)分别为0.8592、0.5316、0.5873、1.5947、1.2348、3.3806、2.0145和9.3230 mg.mL-1 ,Fr.5对这8种供试真菌的IC50值分别为1.0447、0.5015、0.5281、1.5011、1.3516、3.9959、1.1664和2.9855 mg.mL-1。 对乙酸乙酯提取物进行了分离纯化研究,从中分离纯化出5个单体化合物。并利用质谱,核磁共振(1H-NMR, 13C-NMR)等波谱技术对其中一个进行了结构确认,结合文献将其确定为1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2'R)-2-N-(2'-羟基棕榈酰)-9-甲基-4,8-sphingadienine,即脑苷脂B,该化合物是首次从苦楝内生菌中分离得到。