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山茱萸中三种环烯醚萜苷的微波提取及高效液相色谱测定

贺娟妮  
【摘要】:山茱萸系山茱萸科山茱萸属植物山茱萸的干燥成熟果肉,是我国40多种用量较大的骨干药材之一,最早记载见于《神农本草经》。山茱萸自然分布在亚热带、北温带的高山地区,在我国的浙江、河南、安徽、山西、四川、陕西等省分布较广。山茱萸味酸涩,性微温,属收敛性强壮药,有固虚脱、涩精气、补肝肾的多种功效。 大量研究表明,山茱萸总苷是山茱萸药材的主要药效部位,主要包括马钱苷、獐芽菜苷及山茱萸新苷等十余种环烯醚萜苷,具有显著的免疫调节活性和消炎、降血糖、抗癌、强心等多种药理功效,具有广阔的开发应用前景。马钱苷对免疫反应有双向调节作用、对半乳糖胺所致的肝损伤、艾氏腹水瘤细胞、淋巴细胞、人骨髓瘤细胞SP20均有一定的保护作用,獐芽菜苷有抗肝细胞损伤作用。中国药典2005年版将山茱萸中马钱苷的含量作为山茱萸药材的质量控制指标之一。目前,文献中多仅以马钱苷含量评价山茱萸药材的质量,李俊松等采用高效毛细管电泳法测定了山茱萸中马钱苷和獐芽菜苷的含量,若能同时测定山茱萸中马钱苷、獐芽菜苷和山茱萸的含量,则对评价山茱萸药材的质量更全面、合理。本文采用响应曲面法优化了微波辅助提取山茱萸中的马钱苷、獐芽菜苷及山茱萸新苷的条件;考察了三种环烯醚萜苷的高效液相色谱分离条件;研究了山茱萸中的三种环烯醚萜苷的高效液相色谱定性定量分析测定。结果表明: 1.最佳微波提取工艺为:以体积分数72%的乙醇作溶剂,液料比15 mL/g,在微波功率400W下提取10 min,连续提取两次。 2.应用Agilent TC-C 18色谱柱(250 mmx4.6 mm i.d,)分离,以纯水和乙腈为流动相线性梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长240 nm,柱温30℃。 3.在所选的色谱条件下,马钱苷、獐芽菜苷及山茱萸新苷的保留时间依次分别为12.528 min、13.036 min及17.252 min.三个成分的高效液相色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系(r0.9994),加样回收率分别为98.68%、98.24%及98.29%。 本论文包括4个部分。 1.文献综述 介绍了山茱萸的概况、化学成分、药理功能及作用、开发研究现状及意义;从山茱萸总皂苷的化学成分、提取纯化方法、含量测定方法等方面进行了综述;对中草药提取方法的发展及研究现状进行了综述。 2.三种环烯醚萜苷的提取工艺研究 取过40目筛的山茱萸样品粉末5.0 g置于圆底烧瓶中,加72%乙醇50 mL微波(400 W)提取10 min,倾取上清液,残渣再加72%乙醇50 mL,同前操作重复一次,合并滤液,滤纸及残渣用72%乙醇清洗,清洗液滤过并入上液,用旋转蒸发仪蒸发溶剂后冷冻干燥得粗提物,将粗提物溶解定容测定含量,计算提取率。采用响应曲面法对微波功率、提取溶剂以及料液比等提取条件进行了优化。 3.三种环烯醚萜苷的HPLC测定 在最佳提取工艺条件下,提取山茱萸中的三种环烯醚萜苷类化合物,采用HPLC法进行定性及定量分析。 4.研究总结 主要对研究工作进行总结,并对其进行展望。


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