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纸微流控芯片电泳-直接化学发光成像技术联用检测人血清蛋白质

张瑞超  
【摘要】:近二十年来,在利用微分析系统进行化学和生物化学检测方面取得了举世瞩目的进展。在微分析系统中,科学家在PDMS、玻璃、硅片或者其它塑料及聚合物上制作数微米到数百微米宽度的通道或者反应容器用来反应或者分离检测。但是,微分析系统依然有很多需要改进的地方:首先,传统的制作微芯片的过程不仅仅需要昂贵的设备,还需要十分繁复的步骤;其次,传统的微芯片系统需要培训过的专业人士来操作并分析数据,这在发展中国家和不发达地区是稀缺而昂贵的资源。因此,昂贵的微芯片系统不是非常适合发展中国家和落后地区使用。所以,在本文中,我们介绍一种能够在生物分析、医学诊断、药物发展和环境监测中发挥作用的纸微流控芯片。其主要原理是将憎水性的物质打印在滤纸或纤维素膜上,形成一道道憎水性的“栅栏”,这样,滤纸上没有憎水性物质的部分,就形成了亲水性的通道,以便于进行(生物)化学反应或检测。与传统的微芯片制造技术相比,纸微流控芯片最吸引人之处在于其便于携带、简单、价格低廉、样品消耗量低等优点。 由于人血清中的蛋白质在(早期)医学疾病诊断中常常起到了标志物的作用,所以,血清蛋白质的分析检测在生物化学和医学诊断中具有非常重要的意义。而蛋白质定性和定量分析最强有力的推动力来自于蛋白质的量变与特定疾病或者是特定的生理过程有直接关系。微流控芯片发展到今天,对于蛋白质的定量检测,如比色法和免疫法已经得到广泛的应用。但是,其检测的灵敏度已然需要得到改善。 最近几年,化学发光成像技术在生物检测中应用的越来越广泛。而鲁米诺-过氧化氢体系由于其体系的水溶性好,在生物化学中应用是最为广泛的,特别是其作为一种蛋白质探针,能够有极高的灵敏度,因而极具应用价值。但是,血清中的绝大多数蛋白质不能够直接产生化学发光信号,除非该蛋白质中含有金属(离子)。因此,许多用于和蛋白质结合的化学发光探针不断涌现,扩大了化学发光检测方法的应用。但是,这些方法需要较为严格的条件,如严格的pH范围等。 沙丁胺醇是一种人工合成的β2肾上腺素受体激动剂,被广泛的应用哮喘等呼吸道疾病的治疗中。近年来,有关沙丁胺醇的各种检测方法的报道很多。但是,这些检测方法仍然有很多缺点。在本文中,我们建立了一种新的利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和化学发光成像技术检测沙丁胺醇的方法。人体血清蛋白中的结合珠蛋白(Hp)在这里作为检测沙丁胺醇的探针使用。 本文包括两部分:文献综述和研究报告。 第一章是文献综述。 主要介绍了聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳、微流控芯片和纸微流控芯片的研究和基本原理。因为主要是研究蛋白质的分离和检测,所以在文中着重介绍了国内外相关蛋白质和沙丁胺醇研究技术,介绍了这些技术的背景和意义。 第二章是研究报告。 首先,本文建立了聚丙烯酰胺凝胶电泳-化学发光成像技术检测血清中药物沙丁胺醇的方法,研究了血清中的药物沙丁胺醇浓度随时间的变化。聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种对蛋白分离和提纯的检测方法。化学发光成像检测方法是基于鲁米诺一过氧化氢的化学发光体系而建立的一种检测手段。并且推测沙丁胺醇药物对鲁米诺-过氧化氢发光体系的影响机理。此研究方法,对沙丁胺醇药物在血液中的代谢研究有重要的意义。 其次,我们改进了文献报道中的方法,制作了纸微流控芯片。我们用纸微流控芯片来分离和定量检测血清蛋白质。本文中优化了影响分离和发光条件,并将直接化学发光成像技术与三种传统的染色方法进行了比较,绘制出前者的灵敏度曲线,并评价了该方法。纸微流控芯片-直接化学发光成像技术联用检测方法具有如下优点:(1)制作过程不需要昂贵的设备和复杂的过程;(2)检测过程中样品和试剂消耗量低、成本低;(3)灵敏度较高。


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