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山茱萸炮制前后对2型糖尿病小鼠的降血糖作用及机制研究

王韶君  
【摘要】:山茱萸为山茱英科(Cornaceae)山茱英属(Cornus)植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et.Zucc的干燥成熟果肉,具有补益肝肾、涩精固脱的功效,在中国已有悠久的药用历史,是世界三大名贵木本药材之一。目前临床上多以山萸肉、酒萸肉入药,山萸肉敛阴止汗力强,酒萸肉滋补力强。已有研究表明山茱萸在降血糖方面有很好的效果,本论文旨在通过对山茱萸炮制前后的降血糖作用进行比较并探究其作用机理,以期为山萸肉和酒萸肉在临床上的合理使用提供一定的实验依据。本论文利用超高效液相色谱法(UFLC)对山茱萸生品与酒蒸品中6种成分进行检测,分析山茱萸炮制前后有效成分的变化;通过高脂饮食联合低剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病小鼠模型,探讨山茱萸生品与酒蒸品对2型糖尿病小鼠糖代谢、脂代谢、胰岛素PI3K/AKT信号的影响,进一步分析比较山茱萸生品中不同提取物(环烯醚萜苷、鞣质、皂苷及醇提物)对2型糖尿病小鼠的降血糖作用及机制研究。本论文主要结果如下:(1)建立了 UFLC快速测定山茱萸6种成分的方法,色谱柱为Shim-pack XR-ODS Ⅲ(2.0mm×75mm,1.6μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱:0~3min,2%~5%A;3~5min,5%~17%A;5~10 min,17%~17.5%A;10~11min,17.5%~30%A;11~15min,30%~60%A;流速:0.2 mL·min-1;检测波长:250nm;柱温:30 ℃;进样体积:1μL。结果表明该方法快速、简便、准确,为更客观有效地控制及评价山茱萸的质量提供了参考依据。(2)山茱萸生品与酒蒸品中没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷的含量存在差异。酒蒸品中5-羟甲基糠醛、没食子酸、獐芽菜苷和山茱萸新苷含量较生品中均有所增加;而莫诺苷、马钱苷含量有所减少。(3)山茱萸炮制前后的降血糖作用结果表明:给药4w后,山茱萸生品与酒蒸品均能够有效改善2型糖尿病小鼠的糖代谢,与模型组相比,给药组小鼠体重、ISI指数显著增加,HOMA-IR显著降低,OGTT显著改善,各给药组小鼠空腹血糖值均显著降低,且生品高剂量组较酒蒸品高剂量组有显著性差异,山茱萸生品中、高剂量组小鼠FINS水平、HOMA-β显著升高,且生品高剂量组小鼠较酒蒸品高剂量组有显著性差异;其次,山茱萸生品与酒蒸品可以改善2型糖尿病小鼠的TC、TG、LDL-C、HDL-C及FFA水平,说明两者在改善脂代谢紊乱方面均有良好的作用;在胰岛素PI3K/AKT信号通路方面,山茱萸生品组与酒蒸品组均可以显著增加InsR、IRS、PI3K及AKT的磷酸化水平,且生品组小鼠p-InsR/InsR、p-IRS/IRS、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均高于酒蒸品组,但无显著性差异。(4)山茱萸生品中不同提取物的降血糖作用及机制实验结果表明:山茱萸环烯醚萜苷、鞣质、皂苷及醇提物均能够有效改善2型糖尿病小鼠的糖脂代谢紊乱,尤其环烯醚萜苷在降低FBG和升高FINS方面效果更佳;4种不同提取物均可不同程度地改善肝脏的脂肪变性,并对肝脏功能具有一定的保护作用,同时可以修复受损的胰岛细胞;在胰岛素PI3K/AKT信号通路方面,4种提取物均可以上调InsR、IRS、PI3K及AKT的磷酸化水平;在糖异生关键酶基因表达方面,4种提取物均下调了 PEPCK及G6Pase的表达以及转录因子FoxO1的表达。


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