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前胃泌素在胃癌干细胞中表达的初步研究

牛茜  
【摘要】:目的(1)研究人胃癌BGC-823肿瘤细胞系中是否存在悬浮生长的肿瘤球,并检测ABCG2 (ATP-binding cassette superfamily G member 2)、前胃泌素(progastrin, Pro-GRP)、CD44、CD166在肿瘤球中的表达,探讨Pro-GRP与肿瘤球的关系。 (2)研究32例新鲜胃癌组织中Pro-GRP勺表达情况,探讨Pro-GRP与胃癌的关系。 (3)检测大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)中是否有Pro-GRP的表达。 方法(1)取贴壁生长的BGC-823细胞,用有限稀释法和无血清培养法培养,并利用软琼脂克隆形成实验证实BGC-823中存在悬浮生长的具有干细胞特性的肿瘤球,流式细胞仪(FCM)检测该肿瘤球中ABCG2、CD4、CD166的表达。ELISA、细胞免疫荧光、FCM方法比较血清Pro-GRP分别在肿瘤球和贴壁细胞中的表达差异。 (2)采用密度梯度离心法和贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞(MSCs)并传代,在无血清的培养基DMEM/F12中培养,传代扩增,倒置相差显微镜下细胞生长特性和形态。分别取第1代、第2代、第3代MSCs,采用流式细胞仪检测细胞表型,并用ELISA、FCM方法比较血清Pro-GRP分别在人胃癌BGC-823肿瘤球和MSCs中的表达差异 (3)收集新鲜胃癌组织,利用HE染色、组织免疫荧光、免疫组织化学SP两步法检测Pro-GRP在胃癌组织中的表达情况。 结果(1)有限稀释法和无血清培养法均在BGC-823细胞系中培养出了悬浮生长的肿瘤球;克隆能力形成显示:肿瘤球为(37.63±5.99),贴壁细胞为(10.75±3.37),二者间有统计学差异(P=0.007);FCM显示肿瘤球ABCG2的表达率(57.17±3.49)明显高于贴壁细胞(8.67±0.77)(P=0.000);血清Pro-GRP在肿瘤球中的表达(73.37±9.42)明显高于贴壁细胞(5.11±1.03)(P=0.002)。 (2)ELISA检测在MSCs的第1代、第2代、第3代中均有Pro-GRP的表达,FCM检测出Pro-GRP在MSCs的表达为(52.31±4.07),肿瘤球中(49.62±3.81)(P=0.64),明显高于贴壁细胞(7.54±1.56)(P=0.006),但在MSCs口肿瘤球中的表达无统计学意义。 (3)新鲜胃癌组织免疫荧光染色显示Pro-GRP广泛表达,而在正常胃组织和癌旁组织中不表达。 结论:(1)采用有限稀释法和无血清培养结合法能够在人胃癌BGC-823细胞系中培养出悬浮生长的肿瘤球,该悬浮肿瘤球表达SP细胞的特异性标记物ABCG2和CD44,且具备干细胞的特性。 (2)Pro-GRP在悬浮肿瘤球中的表达明显高于贴壁细胞,提示Pro-GRP和干细胞密切相关。在胃癌组织中Pro-GRP均有不同程度的表达,且阳性率随着胃癌TNM分级的升高而依次升高,提示Pro-GRP可能与胃癌的预后有密切联系。 (3)大鼠MSCs中也有Pro-GRP的表达,提示胃癌干细胞可能来源于骨髓间充质干细胞.


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