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冬凌草甲素对人卵巢癌细胞增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制的研究

李娜  
【摘要】:目的观察中药冬凌草的有效提取成分冬凌草甲素对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制及诱导凋亡作用,并探讨其可能的抗肿瘤作用机制。 方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察冬凌草甲素单药及冬凌草甲素联合顺铂对SKOV3细胞的增值抑制情况;倒置显微镜和透射电镜观察SKOV3细胞形态学和超微结构的改变;流式细胞术PI单染检测冬凌草甲素对细胞周期的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染检测冬凌草甲素对细胞凋亡率的影响;甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR, MSP)检测冬凌草甲素作用于SKOV3细胞前后,错配修复基因hMLH1基因CpG岛甲基化状态的变化;实时荧光定量PCR(QRT-PCP)检测冬凌草甲素作用于SKOV3细胞前后,bcl-2、bax、 survivin、hMLH1基因mRNA表达情况的变化。 结果①MTT结果显示冬凌草甲素对卵巢癌SKOV3细胞的增殖具有抑制作用,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05),且呈时间剂量依赖性,24,48,72h的半数抑制浓度(IC50)分别为45.22,33.85,22.48μmol/L;与顺铂合用具有协同抑制作用。②倒置显微镜下可见细胞生长明显受抑制。③透射电镜结果显示,冬凌草甲素组出现空泡变性,染色质浓缩,核染色质边集。④细胞周期显示冬凌草甲素组细胞周期被阻滞于S期和G2/M期。⑤Annex inV-FITC/PI双染检测冬凌草甲素(10,20,30μmol/L)作用细胞48h后细胞的凋亡率分别为(9.13±0.91)%,(18.89±1.79)%,(36.11±3.01)%,明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05)。⑥MSP结果显示hMLH1基因启动子区CpG岛在SKOV3细胞部分甲基化,冬凌草甲素作用细胞后,hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化特异性条带减弱不明显,非甲基化特异性条带明显增强;⑦QRT-PCR结果显示冬凌草甲素作用细胞后,bcl-2、survivin基因mRNA表达下调,bax、hMLH1基因nRNA表达上调,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。 结论①冬凌草甲素对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用;②其抗肿瘤机制一方面可能是通过下调bcl-2、survivin,上调bax mRNA的表达;另一方面可能是通过逆转hMLH1基因CpG岛的甲基化来实现的。


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