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BMSCs联合去细胞肌肉生物支架对急性大鼠脊髓半切损伤修复的影响

魏祥科  
【摘要】:目的以去细胞肌肉生物支架(decellularized muscle bioscaffolds DMBS)接种骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells BMSCs),同种异体移植入大鼠半切损伤体内,观察二者联合移植对脊髓损伤的修复作用。 方法采用改良化学方法制备DMBS,并进行复合冷灭菌,密度梯度离心法提取、贴壁法培养BMSCs,传代三次后采用注射法制备BMSCs-DMBS复合物,14天后扫描电镜及荧光显微镜观察其生物相容性。48只SD大鼠复制脊髓半切损伤模型后随机分配为四组(n=12),A组BMSCs联合DMBS移植、B组单独移植BMSCs、C组单独移植DMBS、D组注射PBS作为空白对照组,成功移植后分别于1、2、3、4周行运动功能评分和术后4周行HE染色观察、免疫荧光检测。 结果Masson染色示DMBS内部呈平行结构,主要为胶原纤维,几乎没有肌纤维。接种BMSCs于支架并孵育14天后,Hoechest33342荧光标记计数显示大量存活BMSCs,扫描电镜可见BMSCs贴附于支架内表面生长。术后4周HE染色示A组损伤空洞较其余三组小,免疫荧光示A组NF200、Nestin阳性表达高于B、C、D组,GFAP则明显低表达(P<0.01)。BMSCs移植到体内后主要迁移至对侧灰质前角,部分分化形似神经元样细胞。术后2-4周大鼠运功功能BBB评分系统A组均高于同期B、C、D组,比较差异有统计学意义(P<0.01),B组术后4周高于C组比较评分差异有统计学意义(P<0.05),D组评分明显低于同期其他3组,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论DMBS具有相对规则的内部结构,与BMSCs具有良好生物相容性,能抑制胶质瘢痕、促进BMSCs的存活、迁徙、分化,是细胞移植理想天然载体。二者联合移植治疗SCI能发挥协同作用,促进运动功能恢复。


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