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TGF-β_(1、2、3)在皮肤创伤再生和瘢痕愈合中的表达差异

张旭  
【摘要】:目的创伤的愈合有两种形式,一是再生修复,二是瘢痕性愈合。TGF-β是迄今为止已知的与创伤愈合及瘢痕形成关系最密切的生长因子,在哺乳动物中有三个亚型,各亚型的作用不尽相同。有关TGF-β亚型对皮肤创伤及瘢痕愈合作用的研究报道很多,然而,对TGF-β各亚型在创面再生及瘢痕形成中的动态变化及差异,尚未见报道。本文旨在检测TGF-β1、β2、β3在创伤再生及瘢痕演变过程不同时期的表达量,比较TGF-β1、β2、β3表达差异,分析TGF-β1、β2、β3在创伤再生修复和瘢痕愈合的作用。 方法 1.将21只日本大耳白兔(全部购自甘肃省兽医研究所,普通级,体重2-2.5kg,雌雄不拘,合格证号:SCKX甘2004-0005)分笼适应性饲养7天后,用5%硫化钠对兔耳腹侧脱毛。恢复性饲养3天后用2%戊巴比妥钠(1.5m1/kg)行耳缘静脉麻醉,充分展平兔耳腹侧,放置于自制的固定台,分别于每只兔耳腹侧用自制取皮刀制作两个平行切面(避开大血管),大小均为1.Ocm×1.0cm,相距约1.5cm,由浅及深的方向分别为耳尖向耳根、耳根向耳尖,最深至软骨层。 2.于伤后0天、3天、6天、9天、12天、27天及50天观察并记录伤口愈合和瘢痕形成情况并拍照存档,每次任取3只日本大耳白兔取材,每组12例标本,共计84例标本。用10%中性甲醛固定后做好标记,24h后制作病理切片,每例标本切两张切片,共168张切片。切片脱蜡后分别行HE染色和免疫组织化学检测,观察创伤愈合及瘢痕形成过程中的组织学改变,并检测TGF-β1、β2、β3在此过程中的动态表达情况。 3.将创面由深到浅分为10段,每段宽度1mm,与浅侧创面相连的1mm宽的正常皮肤作对照,用Image-Pro-Plus6.0图像分析软件检测每段组织内5个视野的平均光密度。 4.统计学处理用SPSS19.0,各组数据用均数±标准差(χ±s)表示,差异性分析时,如果方差不齐则采用秩和检验,如果方差齐,则采用方差分析、最小显著差异法进行多组数据间均数比较和两两比较,P0.05时差异有统计学意义。 结果 1.浅侧创面(距离创面浅侧边≤4mm的创面)于伤后第9天完全再生,深侧创面(距离创面深侧边≤4mm的创面)于伤后第12天上皮化,并形成瘢痕,伤后第27天瘢痕增生达最厚,伤后第50天瘢痕成熟,变软变薄。 2. TGF-β1、β2于创伤早期大量表达,3d即达高峰,表达量随创面的愈合而减少,浅侧创面于12d降至正常水平(P0.05),深侧创面于50d降至正常水平(P0.05),在深侧创面中的表达高峰明显高于浅侧创面(P0.05); 3.TGF-β3在浅侧创面早期开始表达,3d正常对照(P0.05),9d达高峰,12d开始下降(P0.05),在深侧创面中期开始表达,6d正常对照(P0.05),27d达高峰,50d下降(P0.05)。 TGF-β3在浅侧创面中表达的高峰时间早于深侧创面(12d早于27d),但峰值低于深侧创面(P0.05)。 结论 1.浅侧创面再生愈合,深侧创面瘢痕愈合,兔耳再生-瘢痕愈合一体化模型制作成功。 2. TGF-β1、β2在创面早期愈合中有重要作用,TGF-β3在创面中晚期的组织重建及瘢痕形成中有重要作用。


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