红芪多糖HPS4的提取分离及HPS4中四个组分结构特征和活性研究

【摘要】：本文主要研究了红芪多糖4(HPS4)及从中分离得到的四个多糖组分：HPS4-2A、HPS4-1A、HPS4-1B和HPS4-1C的结构特征及其抗氧化和抗凝血活性。用水提醇沉法从红芪中提取的粗多糖HPS4经DEAE纤维素阴离子交换和葡聚糖凝胶色谱柱的分离得到了HPS4-2A、HPS4-1A、HPS4-1B和HPS4-1C四个组分。采用甲基化、部分酸水解、气相色谱、气质联用、多角度激光散射仪、高效凝胶色谱、一维和二维核磁共振波谱技术对收率最高的组分HPS4-2A的结构进行了研究,结果显示HPS4-2A是一个氨基多糖,其分子量为272.0 kDa,主链主要由→4,6)α-D-Glcp(1→,→3,6)β-D-Galp(1→,→4,6)β-D-Galp(1→和→3,4)2-NAc-β-D-Galp(1→组成,分支分别位于以上四残基的O-6,O-3,O-6和O-4；侧链主要由阿拉伯糖和葡萄糖组成,并且还连有硫酸基,连接在→6)β-D-Galp(1→的6位,每隔27-32个残基重复出现一次。使用原子力显微镜(AFM)、透射电镜(TEM)、扫描电镜(SEM)以及十八角度激光散射仪(MALLS)对HPS4-2A的构象进行了分析,结果显示HPS4-2A的构象为高度分支化的构象,在水溶液中相互缠绕为球状。HPS4-1A的结构研究采用了与HPS4-2A相似的研究方法,研究结果显示HPS4-1A是一个中性杂多糖其分子量为73.86 kDa,HPS4-1A的结构及构象研究结果表明HPS4-1A主链骨架由→5)α-L-Araf[1→.→3,5)α-L-Araf(→1.→6)α-D-Galp(1→和→2,6)α-D-Galp(1→组成,侧链分支点位于阿拉伯糖的3位与半乳糖的2位。侧链分支由→4)α-D-Glcp(→1.→4,6)α-D-Glcp(→l.→2)α-L-Rhap(→和→2,4)α-L-Rhap(→1组成。其构象为无规线团状,并且具有单分散性,即表明摩尔质量分布范围较集中,分子大小较均一。除此之外还将HPS4-1B和HPS4-1C的理化性质(包括总糖含量、蛋白质含量、元素组成、单糖组成、糖醛酸含量及分子量)和构象进行了比较。体外抗氧化研究结果显示红芪多粗多糖HPS4的DPPH和羟基自由基的清除率最高,而经纯化后的组分中以HPS4-2A清除自由基的能力最好,HPS4-1A和HPS4-1B的清除自由基能力相当,HPS4-1C清除自由基的能力最弱。体外抗凝血结果表明四组分的抗凝血活性顺序为：HPS4-1CHPS4-1BHPS4-2AHPS4,而HPS4-1A不具有抗凝血活性。