收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

黄芪多糖促进皮肤伤口愈合的作用及其相关机制的研究

赵秉江  
【摘要】:目的:黄芪多糖是黄中药材黄芪的重要生物活性成分,具有增强免疫力、抵抗疾病、增强体质、改善心功能、抗氧化、抗病毒和抗癌症等多种功能。临床实践发现,黄芪可以促进创伤愈合,但其作用机制尚未见报道。本文研究黄芪多糖促进皮肤创面愈合的作用及促进皮肤创面修复的作用机制。方法:第一部分:黄芪多糖的提取、纯化和黄芪多糖软膏的制备。中药材黄芪通过脱脂、水提、醇沉、脱蛋白得到粗的黄芪多糖(Astragalus polysaccharin,APS),粗黄芪多糖APS经过DEAE-Cellulose阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析得到黄芪多糖APS2-1。采用紫外和红外光谱学分析鉴定黄芪多糖APS2-1的纯度和特征吸收峰。黄芪多糖软膏的配方为APS2-1﹕凡士林﹕SDS﹕水=2﹕60﹕2﹕65。第二部分:APS2-1促进小鼠皮肤创面愈合的研究。建立小鼠皮肤切除伤口实验动物模型,将小鼠分为APS2-1组、阴性对照组和阳性对照组,APS2-1组小鼠皮肤创面给予0.5g黄芪多糖软膏,阴性对照组小鼠皮肤创面给予0.5g不含黄芪多糖的凡士林软膏(PBS:凡士林:SDS:水=2:60:2:65),阳性对照组小鼠皮肤创面给予0.5g京万红软膏。每天给药1次,连续给药3周。观察小鼠状态和体重、创面愈合情况、创面组织病理学变化,采用ELISA法检测创面组织中TGF-β1、FGF-2、EGF和Cyclin D1的表达变化。第三部分:APS2-1对成纤维细胞的影响及其作用机制的研究。MTT法测定APS2-1对成纤维细胞CCC-HSF-1增殖的影响,Transwell法检测APS2-1对成纤维细胞CCC-HSF-1迁移的影响,流式细胞分析术检测APS2-1对成纤维细胞CCC-HSF-1细胞周期的影响,qRT-PCR法检测APS2-1对成纤维细胞CCC-HSF-1的Cyclin D1的mRNA转录水平的影响,免疫印迹法检测APS2-1对成纤维细胞CCC-HSF-1的信号通路调控蛋白NF-κB p65、IκBα和细胞周期调控蛋白Cyclin D1表达水平的影响。结果:黄芪多糖的提取、纯化和黄芪多糖软膏的制备。中药材黄芪通过脱脂、水提、醇沉、脱蛋白、透析和冻干得到粗黄芪多糖APS。粗黄芪多糖APS经过DEAE-Cellulose阴离子交换柱分离纯化后被分离成两个峰,其中APS-2为酸性多糖且含量更高。APS-2经过Sephadex G-100分子筛分离纯化后被分离成两个峰,其中APS2-1分子量更大且相对含量更高。APS2-1红外光谱分析显示在4000-400cm~(-1)的波长范围内,于3390、2930、1640、1420、1160、1010、914、760 cm~(-1)等处有明显的吸收峰。APS2-1紫外光谱分析结果显示280nm和254nm未出现吸收峰,说明APS2-1中不含蛋白质、多肽、核酸成分。APS2-1促进小鼠皮肤创面愈合的研究结果显示:给药第7、14、21天APS2-1组小鼠体重显著高于阴性对照组小鼠,APS2-1组和阳性对照组小鼠体重无显著差异。给药第7、14、21天APS2-1组小鼠创面愈合率显著高于阴性对照组小鼠,APS2-1组和阳性对照组小鼠创面愈合率无显著差异。APS2-1组小鼠皮肤创面组织病理学图片显示有少量的炎性细胞浸润,出现了一些纤维母细胞,并且有一些新的血管和新的皮肤形成。阴性对照组小鼠皮肤创面组织病理学图片显示创面组织中出现了大量的炎性细胞浸润,未观察到新的皮肤和新的血管形成。阳性对照组小鼠皮肤创面组织病理学图片显示创面组织有少量的炎性细胞浸润,有一些新的血管和新的皮肤形成。APS2-1组小鼠创面组织中细胞因子TGF-β1、FGF-2、EGF和细胞周期调控蛋白Cyclin D1的表达均显著高于阴性对照组小鼠,APS2-1组和阳性对照组小鼠创面组织中细胞因子TGF-β1、FGF-2、EGF和细胞周期调控蛋白Cyclin D1的表达水平无显著差异。APS2-1对成纤维细胞的影响及其作用机制的研究结果显示:倒置显微镜下成纤维细胞CCC-HSF-1呈现梭形、放射形、三角形、多角形,未贴壁的细胞呈现圆形。在0-48小时内生长缓慢属于潜伏期。48-96小时内增长速率很快呈现指数增长属于细胞增殖的对数期。96-144小时内细胞的生长速率又降低进入细胞生长的平台期。1.0mg/l、5.0mg/l和25.0mg/l的APS2-1作用24、48、72h均能促进CCC-HSF-1增殖,最佳的作用浓度为25.0mg/l,最佳的作用时间为48小时。25.0mg/l黄芪多糖APS2-1呈时间依赖性促进CCC-HSF-1迁移。25.0mg/l的APS2-1能促进CCC-HSF-1向分裂期转变。25.0mg/l的APS2-1能上调CCC-HSF-1的Cyclin D1 mRNA的转录和Cyclin D1蛋白的表达,但下调信号通路调控蛋白NF-κB p65和IκBα的表达。结论:1.本研究建立了黄芪多糖提取和纯化的方法,并且建立了黄芪多糖紫外和红外光谱学鉴定的方法。2.APS2-1促进表皮和真皮增生、促进血管再生,加速小鼠皮肤创面愈合。3.APS2-1促进小鼠皮肤创面愈合的机制包括促进成纤维细胞增殖、迁移、细胞周期向分裂期转变、上调TGF-β1、FGF-2、EGF和细胞周期调控蛋白Cyclin D1mRNA转录和蛋白表达、下调信号通路调控蛋白NF-κB p65和IκBα的表达。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 曹玄林;注射用黄芪多糖通过鉴定[J];河北中医;2001年02期
2 吴丽;刘婷婷;梁剑锋;余精中;;黄芪多糖的分离和纯化[J];食品与药品;2007年04期
3 王梅;李秀丽;刘蕊;;黄芪多糖在恶性肿瘤治疗中的应用[J];中国中医药科技;2009年05期
4 ;黄芪多糖的真伪辨别[J];北方牧业;2010年02期
5 刘立民;张彦明;陆沭华;孙雨梅;何广胜;;黄芪多糖对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响[J];中国免疫学杂志;2010年08期
6 张先海;史丽岩;史景明;;不同方法提取黄芪中黄芪多糖的比较[J];海峡药学;2010年10期
7 朱虎成;;黄芪多糖的提取与应用研究[J];中国动物保健;2011年03期
8 李桂菊;;黄芪多糖的几种鉴别方法[J];养殖技术顾问;2011年05期
9 封士兰,王顼瑞,赵富虎,曹育超,苟克义;黄芪多糖生产工艺研究[J];中成药;1997年12期
10 尹俊青,宋淑珍,田亚平,汪德清;黄芪多糖对健康人群血脂水平的干预效应[J];中国临床康复;2005年31期
11 宋淑珍,田亚平,汪德清,王玲,姜辉,董矜,张阳东;黄芪多糖对健康体检者淋巴细胞亚群的调节作用[J];中国临床康复;2005年11期
12 隆雪明;刘湘新;文利新;;黄芪多糖及其应用[J];中兽医医药杂志;2007年02期
13 安松兰;张善玉;朴惠顺;;1年生黄芪中黄芪多糖对小鼠免疫器官指数的影响[J];延边大学医学学报;2007年01期
14 邓毅;尹龙萍;赵爱华;徐朝晖;马丽萍;贾伟;;黄芪多糖铬络合物的合成及其降血糖活性的初步研究[J];食品科学;2007年06期
15 张亚环;陈萍;王小芳;;正交试验法优选黄芪多糖的水提工艺研究[J];化学世界;2007年06期
16 蔡莉;朱江;;黄芪多糖研究现状与进展[J];中国肿瘤临床;2007年15期
17 项杰;王育斌;徐涛;樊毅;尤鸿;;黄芪多糖在宿主抵抗李斯特菌中的作用[J];武汉大学学报(医学版);2007年06期
18 王华付;;黄芪中黄芪多糖含量的测定[J];安徽农业科学;2007年34期
19 黄东杰;翟翠云;;黄芪多糖的提取方法综述[J];企业科技与发展;2008年22期
20 艾连中;吴艳;郭本恒;王荫榆;;黄芪多糖的研究进展[J];山东食品发酵;2008年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 宋淑珍;田亚平;汪德清;王玲;姜辉;董矜;张阳东;;黄芪多糖提高免疫力机理探讨[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
2 宋淑珍;田亚平;汪德清;王玲;姜辉;董矜;张阳东;;黄芪多糖提高免疫力机理探讨[A];第六届全国自由基生物学与自由基医学学术会议和海峡两岸自由基生物学与自由基医学学术会议论文集[C];2004年
3 宋淑珍;田亚平;汪德清;王玲;姜辉;董矜;张阳东;;黄芪多糖对健康体检者淋巴细胞亚群的作用[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
4 张敬芳;吴勇;王光浩;欧阳静萍;;黄芪多糖对胰岛素信号调节分子蛋白酪氨酸磷酸酶1B的影响[A];全国血栓/止血与微循环学术会议论文汇编[C];2006年
5 刘立民;柴晔;张连生;;黄芪多糖对慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞功能的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
6 邵鹏;赵鲁杭;;黄芪多糖对树突状细胞表型及功能成熟的影响[A];浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2005年
7 林璘;宋泽庆;陈丽芳;;黄芪多糖对哮喘小鼠特异性免疫治疗效果的增强作用[A];第十二届全国数学药理学术大会论文集[C];2009年
8 孙聪;任颖;;黄芪多糖抑制大鼠神经胶质瘤细胞增殖的实验研究[A];中医药生物化学与分子生物学通讯[C];2008年
9 庄金秋;梅建国;沈志强;;黄芪多糖的生物学功能及其在养猪生产中的应用研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
10 李智军;魏连波;吕瑞和;贺丰之;谭晓梅;马志刚;;黄芪多糖治疗大鼠系膜细胞增生性肾炎的研究[A];第六届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵秉江;黄芪多糖促进皮肤伤口愈合的作用及其相关机制的研究[D];兰州大学;2017年
2 田野;黄芪多糖通过诱导树突状细胞成熟对胃癌的抑制作用的研究[D];安徽医科大学;2014年
3 高田林;黄芪多糖三维立体培养小鼠MC-3T3-E1成骨细胞的生物学效应研究[D];吉林大学;2016年
4 袁海星;黄芪多糖脂质体免疫增强剂的研究与应用[D];南京农业大学;2013年
5 李任军;口服黄芪多糖和人参茎叶皂苷增强口蹄疫疫苗及肠道黏膜免疫的研究[D];浙江大学;2017年
6 曾丹;黄芪多糖通过多胺和钙离子调节IEC-6细胞迁移的研究[D];广州中医药大学;2017年
7 樊炼;黄芪多糖胶原促血管新生作用的实验研究[D];南京中医药大学;2010年
8 张晗蕊;黄芪多糖抑制多聚谷氨酰胺蛋白毒性的分子机制研究[D];武汉大学;2011年
9 荆雪宁;黄芪多糖诱导树突状细胞成熟并促进特异性抗肿瘤免疫的实验研究[D];山东中医药大学;2013年
10 袁媛;黄芪多糖对内毒素致小肠上皮细胞损伤的保护作用[D];中国医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邱本军;黄芪多糖的提取及其提高植物抗性研究[D];东北林业大学;2015年
2 李树义;黄芪多糖对小鼠机体免疫功能的影响[D];河北联合大学;2014年
3 郑业龙;车前草多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的研究[D];西南大学;2015年
4 朱云峰;黄芪多糖对脂肪组织中巨噬细胞活化的影响机制[D];新乡医学院;2015年
5 周海燕;黄芪多糖对2型糖尿病大鼠胰岛内质网应激及Bcl-2和Bax表达影响的研究[D];安徽中医药大学;2015年
6 韩涵;黄芪多糖对宫颈癌Hela细胞迁移和侵袭能力的抑制作用[D];新乡医学院;2015年
7 王玉东;黄芪多糖对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用[D];新乡医学院;2015年
8 张齐;黄芪多糖对肺癌细胞共培养体系中BMSCs增殖规律及TAFs相关分子表达的影响[D];甘肃中医药大学(原名:甘肃中医学院);2015年
9 李鹏飞;黄芪多糖粉和银黄粉缓解羊运输应激的研究[D];河北农业大学;2015年
10 张小凡;黄芪多糖通过干预CLP小鼠DC细胞对脓毒症的影响及机制研究[D];广东药学院;2015年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 赵茂华;如何鉴别黄芪多糖原粉[N];中国畜牧兽医报;2008年
2 ;黄芪多糖原粉的鉴别与应用[N];中国畜牧兽医报;2009年
3 徐守业;黄芪多糖的鉴别与应用[N];河南科技报;2009年
4 薄元兰;注射用黄芪多糖通过鉴定[N];中国医药报;2001年
5 冯鸽;用黄芪多糖辅助治疗病毒病[N];山西科技报;2004年
6 马述臣;商品肉鸭保健用药程序[N];中国畜牧兽医报;2009年
7 开封县范村乡许墩兽医站 李明臣;猪病自免疗效好[N];河南科技报;2007年
8 辽宁台安县畜牧兽医科技中心 孙耀华;冬季综防家禽疫病[N];河北科技报;2006年
9 河北农业大学 杨润德;怎样提高鸡群的免疫力[N];河北科技报;2010年
10 行唐县兽医防疫站 王金合;春季防羊痘[N];河北科技报;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978