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奶牛乳房炎主要病原菌药物敏感性及分子特性研究

张莉莉  
【摘要】:目的奶牛乳房炎(bovine mastitis)是由多种病原微生物侵入奶牛乳腺所引发的一种炎症反应。该疾病不仅对世界范围内的奶牛业生产和发展造成了巨大的经济损失,同时也给公共卫生和食品安全带来了严峻的挑战。本研究对采集的奶牛乳房炎乳样进行细菌性病原的分离与鉴定,并对主要病原菌药物敏感性及其分子特性进行了初步研究,为乳房炎的防治及开发新型抗菌药物提供思路。方法1.采用镜检结合16S rDNA扩增技术,对采集的乳样进行细菌性病原的分离与鉴定。2.采用纸片扩散法、刚果红琼脂法及结晶紫染色法,对分离鉴定的大肠杆菌和无乳链球菌进行药敏实验和生物被膜的检测,分析生物被膜的形成与其菌株耐药的相关性。3.采用纸片扩散法和E-test试纸条法、结晶紫染色法及流式细胞仪,分别测定金黄色葡萄球菌(JN5和84184)的药物敏感性、生物被膜形成能力及膜通透性的变化情况。结果1.202份乳样中,大肠杆菌的检出率最高,为34.5%;其次是无乳链球菌和金黄色葡萄球菌,感染率分别为23.0%和11.8%。2.大肠杆菌对青霉素、红霉素和氨苄西林耐药严重,耐药率超过50%;对环丙沙星和万古霉素较敏感。74.8%的菌株形成了生物被膜,其中具有中等以上成膜能力的菌株占73.2%。大肠杆菌生物被膜的形成与其菌株耐药表型(青霉素、氨苄西林、氧氟沙星、红霉素、四环素、氯霉素、环丙沙星和卡那霉素)显著相关(P0.05),产生生物被膜的菌株对这些抗生素的耐药性高于没有产生生物被膜的菌株。3.无乳链球菌对卡那霉素严重耐药,耐药率为97.6%;对氨苄西林、红霉素、四环素、环丙沙星和青霉素普遍耐药;对氧氟沙星、氯霉素和万古霉素较敏感。78.0%的菌株形成了生物被膜,其中具有中等以上成膜能力的菌株占74.3%。无乳链球菌生物被膜的形成与其菌株耐药表型(青霉素、氨苄西林、红霉素、四环素、环丙沙星和卡那霉素)显著相关(P0.05),其中对这些抗生素耐药的菌株100%产生了生物被膜。4.金黄色葡萄球菌对青霉素、氧氟沙星和氨苄西林耐药严重,耐药率在69%以上;对氯霉素和万古霉素较敏感。法尼醇能够促进菌株(JN5和84184)对抗菌药物(青霉素、氨苄西林、卡那霉素、四环素、万古霉素、环丙沙星和氯霉素)的敏感性,抑制生物被膜的形成,并且随着法尼醇浓度(0-100μM)的增大,这7种抗生素的最小抑菌浓度降低,生物被膜的形成能力减弱,膜通透性增大。结论1.大肠杆菌对青霉素、红霉素和氨苄西林耐药严重,无乳链球菌对卡那霉素严重耐药,金黄色葡萄球菌对青霉素、氧氟沙星和氨苄西林严重耐药。在乳房炎防治中,临床上给药前先做诊断,以便选择合适药物进行治疗。2.大肠杆菌和无乳链球菌具有较强的生物被膜形成能力,且生物被膜的形成与其菌株耐药表型之间存在相关性。3.随着法尼醇浓度的增大,金黄色葡萄球菌药物敏感性增强,生物被膜的形成能力减弱,膜通透性增大。在使用抗生素治疗细菌感染性疾病时,可配合运用法尼醇,以增强菌株对抗生素的敏感性,提高治疗效果。


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