收藏本站
收藏 | 论文排版

分泌蛋白及外泌体对肝癌细胞影响的蛋白质组学研究

苏刚  
【摘要】:肿瘤作为威胁人类健康主要疾病之一,具有较高发病率和死亡率。在了解肿瘤发生机制基础上进行有效早期诊断,理想治疗靶点和合理预后检测的研究则十分重要。肿瘤的持续生长、侵袭和转移依赖于癌细胞和/或间质细胞在肿瘤微环境中交互作用。微环境中这些细胞分泌的细胞外基质成分、活性因子、细胞外囊泡,不仅参与了炎症反应、血管淋巴生成、细胞增殖、细胞转移侵袭、免疫抑制、上皮-间质转化等过程,也是肿瘤潜在标记物和治疗药物靶点的丰富来源。肝细胞肝癌作为慢性炎症、血管生成、微环境等相互作用的最终结果,探讨微环境中分泌组分在肝癌发生中的作用,具有一定科学意义和临床价值。肝脏特异性间质细胞-肝星状细胞,以及肝实质肿瘤细胞在微环境中的作用,即这些细胞释放的产物如分泌蛋白、外泌体等对肿瘤的影响,尚不完全清楚。本研究在利用蛋白质组技术分析其分泌产物组成基础上,探讨分泌蛋白、外泌体对肿瘤细胞增殖、迁移的影响以及在肿瘤药物抵抗中的作用,并表征影响后肿瘤细胞蛋白表达差异,通过生物信息学结合在线数据库进行注释和分析,为揭示肿瘤微环境动态组成以及在肿瘤发生中的分子机制,提供基础研究数据和参考。本研究采用人肝癌细胞系Huh7,SMMC-7721以及人活化肝星状细胞系LX-2,分别通过超滤法提取其分泌蛋白、超速离心法和试剂盒提取其外泌体;在电镜和Western blot鉴定外泌体基础上,利用双向电泳技术表征分泌蛋白及外泌体蛋白质组成。通过CCK-8法观察细胞活力,划痕实验和Transwell小室法观察细胞迁移能力,探究分泌蛋白、外泌体对肿瘤细胞的影响以及在索拉菲尼耐药中的作用。利用双向电泳技术表征分泌蛋白、外泌体影响肿瘤细胞的表达差异蛋白,并经MALDI-TOF/TOF质谱鉴定。最后通过生物信息学方法以及在线数据库TCGA和GEO,整合分析、注释分泌蛋白及外泌体蛋白质及其影响后的肿瘤差异蛋白之间的关系。结果显示,来源于Huh7、SMMC-7721、LX-2细胞的分泌蛋白和外泌体对肿瘤细胞的增殖和迁移能力有一定影响(P0.05);肿瘤细胞来源的外泌体能促使Huh7、SMMC-7721细胞对索拉菲尼产生一定的耐药性(P0.05);经蛋白质组表征,肿瘤细胞Huh7、SMMC-7721和肝星状细胞LX-2来源的分泌蛋白和外泌体具有不同的蛋白表达谱,分泌蛋白成分多源于外泌体;不同方法提取外泌体表达谱不同;LX-2分泌蛋白与其引起肿瘤细胞表达差异蛋白共同参与应激反应,部分蛋白参与NF-kB通路以及内质网中的蛋白质过程并与肿瘤发生及不良预后显著相关(P0.01)。微环境中外泌体与其干预肿瘤细胞差异表达蛋白共同参与了多种生物过程,部分蛋白与肿瘤发生及不良预后显著相关(P0.01),并参与了肿瘤细胞对索拉菲尼的耐药过程。综上所述,本研究结论如下:肿瘤微环境中活化肝星状细胞与肿瘤细胞分泌蛋白及外泌体表达谱不同,分泌蛋白大多来源于外泌体;肿瘤微环境中分泌蛋白和外泌体对肿瘤的增殖和迁移,以及肿瘤来源外泌体对肿瘤的耐药性有一定程度影响,并能改变肿瘤细胞蛋白的表达水平。差异蛋白参与了部分应激途径,如内质网蛋白失衡、糖酵解以及PI3K-Akt信号通路、Rho依赖的细胞运动信号通路来促进肿瘤的增殖与迁移;RAN、CAP1、HSPA5、ANXA5、DNM1L、PSMA6、PYGB、SGTA蛋白与肝细胞肝癌的发生、不良预后显著相关;ANXA5、YWHAZ、蛋白酶体等与索拉菲尼耐药有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前16条
1 ;第六届中国蛋白质组学大会在我市召开[J];泰州科技;2009年08期
2 王彦青;韩菲;;蛋白质组学研究热点及展望[J];中学生物教学;2006年03期
3 周倩;朱宏建;;蛋白组学教学内容与教学方式的改革初探[J];课程教育研究;2017年10期
4 彭昌文;蛋白质组学研究进展[J];中学生物教学;2003年03期
5 陈龙;蛋白质组学[J];生物学教学;2000年11期
6 黄毅;万瑛;;第三军医大学第二届蛋白质组学和代谢组学论坛会讯[J];第三军医大学学报;2016年22期
7 田瑞军;;蛋白质组学专刊序言[J];生命的化学;2017年01期
8 刘幸;王慧;周虎;;基于质谱的药物蛋白质组学研究[J];生命的化学;2017年01期
9 余乐正;柳凤娟;吴正雨;冉小强;;分泌蛋白质组学在肿瘤标志物中的研究进展[J];生物技术通报;2017年03期
10 张辉;白晨;王华忠;张惠忠;李晓东;付增娟;赵尚敏;鄂圆圆;张自强;王良;;甜菜蛋白质组学研究进展[J];中国糖料;2017年02期
11 乔良;;关注泪液蛋白质组学研究在眼表疾病中的临床意义和应用[J];临床检验杂志(电子版);2017年02期
12 王乐乐;赵濛;韩文静;王志新;张燕军;李金泉;;基于质谱的蛋白质组学技术及其在绒毛用羊中的应用[J];中国畜牧兽医;2015年12期
13 黄云;马洪雨;;浅谈蛋白质组学实验室的建设与管理——以南京农业大学植物保护学院蛋白质组学实验室为例[J];高校实验室工作研究;2014年04期
14 宋克敏;杨蓉娅;;蛋白质组学在皮肤科的研究进展[J];中国麻风皮肤病杂志;2009年12期
15 刘晓霞;康娅;刘聪;倪艳;岳永花;郝旭亮;;血栓性疾病蛋白质组学的研究进展[J];医学综述;2015年10期
16 钟晶敏;李晶;刘志红;欧阳取长;曾亮;;蛋白质组学技术在恶性肿瘤研究中应用的新进展[J];现代生物医学进展;2015年18期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 罗琦;刘凤斌;廖荣鑫;;蛋白质组学与中医病、证的相关性[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年
2 李克;苟黎明;邵小宝;朱慧;;蛋白质组学研究中高丰度蛋白去除方法的研究进展[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
3 李伽诺;姜子涛;李荣;;二氧化钛在磷酸蛋白质组学研究中的应用[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
4 李学任;魏路清;;蛋白质组学技术在肺部疾病应用及进展[A];中华医学会第三届全国间质性肺病暨弥漫性泛细支气管炎学术会议论文汇编[C];2010年
5 张薇;杨拴盈;尚文丽;刘晓丽;周丹菲;蒋梅花;;定量蛋白质组学研究肺腺癌细胞及正常支气管上皮细胞线粒体[A];中华医学会第五届全国胸部肿瘤及内窥镜学术会议论文汇编[C];2011年
6 李学军;;蛋白质组学—药物发现的新途径[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第一部分)[C];2002年
7 曾嵘;夏其昌;;蛋白质组学的国内外进展[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
8 曾嵘;夏其昌;;蛋白质组学研究的一些体会[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
9 郝佩;刘琪;黄音;林建;杨少友;李亦学;;整合的蛋白质组学数据分析系统[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
10 梁宋平;张丽军;柳亦松;曹锐;谢锦云;;细胞质膜蛋白质组学研究方法与应用[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 苏刚;分泌蛋白及外泌体对肝癌细胞影响的蛋白质组学研究[D];兰州大学;2018年
2 孙欣;鸭坦布苏病毒感染细胞蛋白质组学分析及DDX3X对复制的影响[D];华中农业大学;2017年
3 郭金菊;辣椒细胞质雄性不育花药的蛋白质组学分析及CaSEP5基因的功能分析[D];中国农业大学;2018年
4 周毛天;通过定量蛋白质组学研究细菌病原体蛋白MgtC功能以及宿主对SeV病毒感染的应答[D];武汉大学;2015年
5 张勤;基于转录组学、蛋白质组学和代谢组学技术探讨天疱疮发病机制的研究[D];安徽医科大学;2018年
6 孙金龙;基于蛋白质组学探讨补肾中药对高龄肾虚不孕妇女生育力影响的研究[D];山东中医药大学;2017年
7 王秀臻;柔嫩艾美耳球虫入侵DF1细胞的转录组学及蛋白质组学分析[D];山东农业大学;2018年
8 周荃;精原干细胞(SSCs)的建系及蛋白质组学分析[D];南京医科大学;2015年
9 毛仁俊;基于转录组和蛋白质组学研究航天诱变决明株系的变异机制[D];西北农林科技大学;2018年
10 冯昕;基于蛋白质组学的高抗铜微紫青霉菌铜抗性机制研究[D];广西大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张恤民;沃芬血气分析仪营销渠道管理优化研究[D];兰州理工大学;2018年
2 胡斐;急性和短期组合训练对心脏自主神经功能和运动能力产生的影响[D];南京体育学院;2018年
3 罗迪;野牛草叶、根对差异光周期的生理应答及其蛋白质组学研究[D];中国林业科学研究院;2018年
4 裘乃麒;基于质谱数据的蛋白质水平质量控制工具的分析研究[D];华东师范大学;2018年
5 李忠晴;橡胶草响应茉莉酸的蛋白质组学研究[D];石河子大学;2018年
6 韩雪;甜菜细胞质雄性不育系的线粒体蛋白质组学分析[D];哈尔滨工业大学;2018年
7 裴悦;猪伪狂犬病毒感染PK15细胞的蛋白质组学研究[D];浙江农林大学;2018年
8 郭娟娟;基于蛋白质组学的柴胡皂苷A抗抑郁靶标蛋白的筛选及作用机制研究[D];山东大学;2018年
9 张美瑜;膝关节骨性关节炎性别差异的蛋白质组学研究[D];广西医科大学;2018年
10 张立亚;亚甲减小鼠肝脏脂代谢相关的miRNA表达谱和蛋白质组学特征研究[D];山东大学;2018年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 付东红 通讯员 李紫艺;单细胞蛋白质组学研究获突破[N];健康报;2018年
2 本报记者 白毅 通讯员 沈基飞;行进在蛋白质组学的“登月之旅”[N];中国医药报;2014年
3 通讯员 吴志军 王来国;“人类重大疾病的蛋白质组学研究”项目启动[N];光明日报;2002年
4 本报记者 李雪墨;专家看好蛋白质组学研究[N];中国高新技术产业导报;2002年
5 李江;第六届中国蛋白质组学大会召开[N];医药经济报;2009年
6 郝成涛;我国蛋白质组学研究势头强劲[N];中国医药报;2009年
7 记者 王庭君;600多名蛋白质组学专家来泰研讨[N];泰州日报;2009年
8 吴志军 郝成涛;我科学家荣获首届“国际蛋白质组学成就奖”[N];科技日报;2009年
9 郝成涛;贺福初荣获国际蛋白质组学成就奖[N];中国医药报;2009年
10 吴志军 王来国;蛋白质组学研究在我国启动[N];中国医药报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978