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骨髓间充质干细胞在缺氧缺血性脑病治疗应用前景的实验研究

石静云  
【摘要】:目的 建立成人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外培养和扩增的方法,建立稳定的MSCs体外培养扩增体系。观察MSCs在腹腔注射后能否通过新生大鼠血脑屏障进入脑实质。观察MSCs在血脑屏障中的最佳穿透时间以及缺氧缺血性脑病(HIE)后注射MSCs进行治疗的最佳时间。观察MSCs在脑组织的分布特点及分化特性,并观察新生大鼠HIE对MSCs透过率的影响。在药物辅助干预下,观察MSCs在脑组织的分布特点及分化特性是否有所更改。 方法 取正常成人骨髓30ml,采用密度梯度离心法体外扩增MSCs,移植前48小时加入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷标记MSCs。Rice法建立新生Wistar大鼠HIE模型,2h后分别经腹腔注射3×10~6MSCs细胞悬液0.4ml(n=8)和加用复方丹参注射液0.4ml(n=2)以及注射单纯的Brdu标记液0.4ml(n=5),对照组采用同龄正常Wistar大鼠分别经腹腔注射3×10~6MSCs细胞悬液0.4ml(n=8)和单纯的Brdu标记液0.4ml(n=5)。移植后分别于24h、3天、14天、25天取大脑做石蜡切片,SP免疫组化DAB显色检测并计数进入脑组织的MSCs,观察其穿过血脑屏障的最佳时间以及主要分布特点,通过NSE、NF、GFAP的检测,观察其向神经细胞分化的能力,通过CD44的检测证明神经细胞是由人源性的间充质干细胞所分化。HIE模型建立后再于48h经腹腔注射3×10~6MSCs细胞悬液0.4ml


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