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高原大鼠严重烫伤延迟复苏后肝脏缺血缺氧损伤机制的实验研究

刘长海  
【摘要】: 目的:探讨高原地区不同海拔高度严重烫伤延迟复苏后大鼠肝脏损伤机制。方法:取健康雄性Wistar大鼠240只,随机分为低海拔组(1517m)和高海拔组(3848m),每个海拔高度随机分为延迟复苏组(DFR,n=50)、即时复苏组(IFR,n=60)和假伤组(SG,n=10),于背部建立总体表面积为30%的烫伤模型,分别于伤后1h、6h、12h、24h、72h和168h各取10只大鼠剖腹取材。采用组织病理学、手工组织芯片技术、TUNEL法、免疫组化与图象分析技术,检测肝组织细胞凋亡、HIF-1α、P53、Bcl-2和HSP70在肝组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。 结果:1.随海拔高度的增加,肝细胞浑浊肿胀、胞质疏松化明显,汇管区及肝窦内炎细胞浸润明显,肝细胞坏死及嗜酸性小体逐渐增多。2.HIF-1α阳性表达多位于肝细胞核中,两个海拔高度HIF-1α的表达强度实验组均高于假伤组,随海拔梯度上升,HIF-1a蛋白表达增强,各海拔高度DFR组表达高于同海拔IFR组,在伤后6、12、24、72h时相点,海拔3848m各实验组分别高于海拔1517m各实验组(P0.05)。3.P53的阳性表达多位于肝细胞核中,胞浆也有少量表达,其表达其趋势与HIF-la蛋白表达趋势基本一致,定量分析显示亦与HIF-1α一致。4.各海拔高度假伤组即有Bcl-2的表达,同一海拔高度DFR组在伤后6h时相点表达强度高于相对应的IFR组(P0.05),高海拔DFR组与IFR组在伤后6、72h时相点表达强于相应的低海拔组(P0.05)。各试验组于伤后6h Bcl-2表达最高(P0.01),12h表达明显下降,24h下降至最低水平。5.HSP70主要表达于肝细胞浆中,两个海拔高度其表达强度实验组均高于假伤组,随海拔梯度上升,HSP70蛋白的表达增强,各海拔高度DFR组高于IFR组(P0.05)。6.肝细胞TUNEL阳性表达呈深棕色,染色质浓缩,表达于肝细胞核内,各海拔高度其表达强度DFR组和IFR组均高于SG组,随海拔高度上升TUNEL表达增强,各海拔高度DFR组表达强度高于同海拔IFR组,在伤后6、12、24、72h时相点,高海拔组细胞凋亡率均强于相应的低海拔组(P0.05) 结论: 1.随海拔高度的增加,严重烫伤延迟复苏大鼠肝组织病理损害明显加重; 2.高原地区严重烫伤延迟复苏后肝细胞损伤与细胞凋亡有关,且肝细胞凋亡数量随海拔梯度升高而增加; 3.HIF-1α、P53可能参与了高原地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肝细胞损伤; 4.P53、Bcl-2对高原地区不同海拔高度严重烫伤延迟复苏大鼠肝细胞凋亡具有调节作用; 5.HSP70可在一定程度上反应肝脏应激水平或损伤程度,可作为肝细胞应激反应的生物学标志。


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