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在细胞三维立体培养模型中观察VEGF对H460细胞MMP-2表达的影响

郭晓斌  
【摘要】: 肺癌是当今世界发病和死亡率最高的恶性肿瘤,浸润和转移是肺癌患者死亡的主要原因。肺癌的浸润和转移与基质金属蛋白酶,血管内皮生长因子等多因素密切相关。 基质金属蛋白酶是一组锌离子依赖性内肽酶,肿瘤和间质成分来源的基质金属蛋白酶均可通过降解细胞外基质及基底膜的大部分成分影响肿瘤的发生、发展和转移。基质金属蛋白酶2能降解基底膜Ⅳ型胶原及参与血管新生,与肿瘤的关系密切。 血管内皮生长因子是作用最强、特异性最高的参与微血管生成的正向调节因子,研究发现多种肿瘤细胞表达VEGF蛋白,如前列腺癌、肺癌、胃癌、乳腺癌等。 本文深入研究肺癌中MMP-2及VEGF的表达与功能,揭示肺癌的浸润与转移的机制,可为评估肺癌的浸润、转移及预后提供重要的参考指标。 目的 建立H460细胞三维立体培养模型,探讨VEGF对H460细胞MMP-2表达的影响。 方法 采用非小细胞肺癌(NSCLC)H460细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,随机分成3组,给与不同浓度的VEGF,明胶酶谱法测定3组MMP-2的表达情况 结果 (1)各组H460细胞生长良好; (2)各实验组的H460细胞在不同浓度的VEGF和不同时间的作用下,细胞内的MMP-2的表达有差异。立体培养24h小时后取各组上清液跑明胶酶谱,MMP-2酶原及活化酶活性随着VEGF浓度的增高而有不同程度的增强,立体培养48h小时后取上清液跑明胶酶谱,VEGF浓度高,MMP-2酶原及活化酶活性增强,且较24h表达有所增强。 结论 (1)VEGF能上调H460细胞内MMP-2表达,且促进作用具有剂量-时间依赖性;VEGF浓度越高,时间越长,MMP-2及其活化酶的表达越强。其促进肿瘤生长和转移与促进MMP-2的表达有关。 (2)三维立体培养模型有利于观察和研究基质金属蛋白酶在肿瘤侵袭和转移的作用。


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