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重组猪生长素基因工程菌培养基优化及高密度液体发酵研究

李昆鹏  
【摘要】:目前毕赤酵母发酵罐发酵培养,大多数依然采用invitrogen公司毕赤酵母发酵工艺手册上提供的基础盐培养基或BMGY/BMMY培养基。基础盐培养基成分复杂,主要以盐类元素为主,营养单一,且价格相对较高,尤其是这类培养基不能混合高温灭菌,否则容易形成沉淀。本研究优化了工程菌发酵罐发酵培养基,同时在摇瓶基础上优化了工程菌发酵罐发酵工艺。减少了猪生长素工业生产成本。 (1)本研究以马铃薯渣水解液做基础C源,以豆渣水解液做基础N源,用正交实验对猪生长素毕赤酵母工程菌培养基进行优化,结果,100ml优化培养基马铃薯渣水解液用量为12ml,豆渣水解液用量是25ml,K_2HPO_4用量为0.5g,麦麸水用量为0.8ml。用这种培养基优化培养经过筛选的高产重组猪生长素基因工程菌,经过60h诱导,最终收获上清中总蛋白量可达到78.4mg/L。用麦芽汁培养基经过相同培养及诱导条件,测定最终收获上清中总蛋白量为88.4mg/L。且这样经过优化的适宜于毕赤酵母工程菌生长及表达的培养基是麦芽汁培养基培养基成本的2.3%。比BMGY/BMMY培养基成本降低了8642.6倍。大大降低了工业生产成本。获得优质且廉价的工业用高密度液体发酵培养基。 (2))通过对接种量,诱导时间,初始pH等条件的研究,确定了适合基因工程菌毕赤酵母GSll5的最优发酵条件。即:接种量为l0%,初始pH8.0,诱导时间60h收获。在此条件下发酵上清液中蛋白总浓度为78.4mg/L。


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