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核桃内生菌发酵产物生物活性及花序的化学成分研究

王文娟  
【摘要】:核桃(Juglans regia)系胡桃科核桃属(Juglans)植物,别称胡桃,羌桃,属于落叶乔木、深根性、喜温树种。分布于我国陕西、甘肃、云南、四川、河北等地区。本实验对核桃花序乙醇提取物生物活性及化学成分,核桃根、茎、叶的内生菌及其代谢产物的活性进行了研究,研究结果如下:第一,采用滤纸片法研究核桃花序乙醇提取物抑菌活性,结果表明,核桃花序乙醇提取物中的抑菌活性成分主要分布在乙酸乙酯部位。采用DPPH自由基清除活性测定法、总还原力测定法和羟基自由基清除活性测定法研究了核桃花序乙醇提取物抗氧化活性,DPPH自由基和羟基自由基清除活性测定结果显示,抗氧化活性成分主要集中在中等极性的乙酸乙酯部位;而总还原力测定结果显示,抗氧化活性成分主要集中在极性较大的正丁醇部位。采用多种现代色谱分离手段和现代波谱技术对核桃花序的化学成分进行研究,共分离得到9个化合物,鉴定了其中的7个,它们分别是1-(1-甲基-丁-3-烯基)-2-(1,1-二甲基-丙氧基)-4-甲苯(1)、β-谷甾醇(2)、4,8-二羟基-1-四氢萘醌(3)、(Z)-7-乙酰-甲基-11-甲基-3-亚甲基-十二碳-1,6,10-三烯(4)、2S,3S,4S-三羟基戊酸(5)、3-甲氧基-2-[3-羟基苯基]-4H-呋喃[2,3-H]-1-苯并吡喃-4-酮(6)、槲皮素-3-O-(2”-β-D-吡喃葡萄糖基)-α-L-鼠李糖苷(7)。第二,采用组织分离法对核桃根、茎、叶的内生真菌进行了分离,共分离得到19株内生真菌,其中根部7株,茎部5株,叶部7株。对其中产孢子的8株内生菌进行形态学鉴定。结果表明,它们分属于链格孢属Fusarium(2株)、串珠霉属Monilia(1株)、侧孢霉属Sporotrichum(1株)、曲霉属(Aspergillus)(1株)、青霉属Penicillium(2株)和微囊菌属Microascus(1株)共6个属,丛梗孢目(Miniliales)和微囊菌目(Microascales)2个目,涉及丝孢纲(Hyphomycetes)、真子囊菌亚纲(Euascomycetes),为后续内生菌及发酵产物活性研究提供了丰富材料。第三,分别采用滤纸片法,DPPH自由基清除法、羟自由基清除法和总还原力法对核桃内生真菌发酵产物做体外抑菌活性、抗氧化活性研究。抑菌研究结果表明,乙酸乙酯部位活性较好的菌株有6株,占总菌株的31.57%,根部活性菌株最多,其中R-401(根)对5种指示菌都有很强的抑制活性,对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎链球菌最小抑菌浓度均达到了0.313 mg/mL,而S-101(茎)有较强的抑菌作用,对地衣芽孢杆菌最小抑菌浓度为0.313 mg/mL,而正丁醇部位抑菌活性较弱,其中活性较好的为L-102,对绿脓杆菌、肺炎链球菌的抑菌活性最强,最小抑菌浓度都达到0.625 mg/mL,而S-101对地衣芽孢杆菌的最小抑菌浓度也为0.625 mg/mLo乙酸乙酯部位抗氧化活性结果表明,DPPH自由基清除活性测定实验中,19个样品均有不同程度的清除能力,其中有9个样品有较强的清除率,占总数的47.36%。总还原力测定结果表明,19个样品均表现出还原力,其中R-401的维生素C相当含量为157.66μg/mg,其它样品的维生素C相当含量都小于100μg/mg。羟基自由基活性测定结果表明,核桃内生菌对羟基自由基的清除能力较弱,只有R302、S-101的清除率大于50%,分别为71.86%、53.09%。正丁醇部位抗氧化活性较弱。以上研究结果表明,核桃花序化学成分丰富多样,核桃内生真菌种群繁多,发酵产物具有很好的抑菌、抗氧化活性。为开发利用核桃花序资源,为核桃内生真菌活性成分的进一步研究奠定了基础。


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