收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

绵羊精子冷冻前后差异蛋白质组学研究

李鸿岩  
【摘要】:超低温冷冻保存精子为长期保存遗传资源提供了可能,但超低温冷冻会影响精子的生理和形态。冻融过程温度和渗透压的改变会改变精子的质膜流动性、质膜通透性、脂质组成以及线粒体活性,也会造成蛋白质的缺失、表达量和功能的改变。本研究以绵羊冻精为实验材料,对不同的精子蛋白制备方法和二维电泳不同上样量进行了探索,建立了绵羊精子蛋白质组学研究技术平台。同时以绵羊鲜精和同一批次自制的冻精为实验材料,利用二维电泳技术建立了绵羊精子冻融前后蛋白质表达图谱。采用PDQuest8.0软件对凝胶图谱蛋白质进行分析,并检测差异表达蛋白质。 结果显示:(1)利用一维SDS-PAGE电泳比较三种绵羊精子蛋白质制备方法,热的Trizol法更适合绵羊精子蛋白质制备。(2)采用17cm (pH4~7) IPG预制胶条,考马斯亮蓝染色后合适的上样量为0.45mg。(3)在冻鲜精凝胶上共检测到14个差异表达蛋白质斑点,在冻融精子凝胶上表达上调的有5个,表达下调的有3个,新表达的2个,缺失的有4个。差异蛋白质斑点经液相色谱串联离子阱质谱(LC-MS/MS)鉴定,在国际生物信息学中心数据库搜索到相对应的5种蛋白质:推定的热休克蛋白70.1、转录因子AP-2α蛋白、烯醇酶、烯醇酶1和血清白蛋白前体。在冻融精子中,推定的热休克蛋白70.1、烯醇酶和烯醇酶1表达下调,转录因子AP-2α蛋白表达上调,血清白蛋白前体来自精浆。推定的热休克蛋白70.1需要通过多级质谱与热休克蛋白70.1进行序列同源比对和功能预测,烯醇酶和烯醇酶1与精子活力有关,转录因子AP-2α蛋白能结合在精子DNA特殊序列并激活基因转录,在冷冻过程中,血清白蛋白前体能够与精子表面结合从而保护精子。 研究表明:绵羊精子经超低温冷冻后蛋白质的表达存在差异,对差异表达蛋白质的研究有利于探索绵羊精子在冷冻过程中的生理状态,为进一步研究绵羊精子蛋白质组学、寻找冻伤的生物学标志及揭示精子冻伤机理奠定基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张贵学;贺桂馨;张大鹏;;长期输精管结扎对兔精子发生的影响[J];东北农业大学学报;1993年02期
2 陆雅君;潘雅玲;;东方次睾吸虫电镜研究 Ⅲ、精子和精子发生[J];上海交通大学学报(农业科学版);1990年01期
3 赵云龙,堵南山,赖伟;日本沼虾精子发生的研究[J];动物学报;1997年03期
4 洪水根,李祺福,郭永刚,倪子绵,黄加祺,周时强;斑节对虾精子发生的超微结构[J];动物学报;1998年01期
5 王艺磊,张子平,李少菁;甲壳动物精子学研究概况Ⅱ.精子发生与精子的生化组成[J];动物学杂志;1998年04期
6 洪万树,翁幼竹,林君卓,方永强,戴燕玉;鲻鱼精子发生和形成的超微结构研究[J];海洋学报(中文版);2001年05期
7 张静,侯林,吕红丽,姚锋,王伟,高岩;双壳类精子发生的研究[J];东海海洋;2003年04期
8 李根亮;康现江;曹刚;穆淑梅;葛少钦;;低温及胰酶加Ca~(2+)对中华绒螯蟹精子顶体反应的诱导[J];海洋水产研究;2008年01期
9 管卫兵;宣富君;戴小杰;朱江峰;;东海三疣梭子蟹精子发生及精荚形成[J];中国水产科学;2009年02期
10 刘伟石;李和平;邹琦;任艳玲;;γ-氨基丁酸诱发马鹿精子顶体反应[J];东北林业大学学报;2009年09期
11 刘泽隆;影响精子发生的几种局部调节因子[J];动物医学进展;1997年03期
12 胡欧明,钟金城,蔡立,陈智华,江明峰,王正明;犏牛精子发生水平的研究[J];西南民族学院学报(自然科学版);1999年01期
13 谭小军;黄志平;李蔍芸;聂东宋;钟锠高;傅俊江;卢光琇;;一个人类精子发生相关新基因TSARG7的克隆和初步功能研究(英文)[J];遗传学报;2006年04期
14 李贺娟;倪和民;薛君忠;张宏;杨飞鸽;刘烈琴;;钙离子浓度对绵羊精子获能的影响[J];中国畜牧兽医;2009年10期
15 陈晓丽;朱化彬;郝海生;杜卫华;赵学明;孙艳艳;胡传活;王栋;;猪精子冷冻损伤研究进展[J];中国生物工程杂志;2010年07期
16 王艺磊,张子平,李少菁;锯缘青蟹精子发生的超微结构[J];动物学报;1997年03期
17 刘雪珠,石戈,王日昕;黑鲷精子发生过程中的超微结构变化[J];海洋科学;2005年10期
18 傅丽容;洪美玲;史海涛;黄元华;张扬波;;四眼斑水龟雄性生殖器官的季节性变化[J];水产科学;2007年02期
19 王满意;王鲜忠;孙燕;张家骅;;支持细胞骨架与精子发生研究进展[J];动物医学进展;2007年04期
20 蔡东章;白素芬;李欣;陈学新;;小菜蛾精子发生的形态学观察[J];河南农业大学学报;2008年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 洪水根;倪子绵;薛如;孙涛;刘桂杰;韩俊雁;;中国鲎精子发生的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
2 何莹;侯林;杨万喜;;Myosin Va在中华绒螯蟹精子发生过程中的空间分布与表达[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
3 王彦平;王亮;李俊杰;周光斌;朱士恩;;冷冻对精子超活化水平的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
4 袁秀堂;周一兵;;墨西哥湾扇贝精子发生的超微结构和细胞化学[A];贝类学会第七次会员代表大会暨第十一次学术讨论会摘要[C];2003年
5 马全红;郭睿;王海坤;王会珍;葛晔华;马静;陈咏梅;韩代书;;一个在小鼠精子发生后期特异表达基因(SRG-L)的克隆及分析[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
6 彭彬;张仁东;邓显忠;万勇;杨正伟;;弥猴输精管结扎对精子发生的影响——体视学定量研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
7 张明凤;赵云龙;;隆线溞精子发生及成熟精子的超微结构[A];中国动物学会甲壳动物学分会、中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会2004年甲壳动物学分会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2004年
8 孙广峰;王达利;魏在荣;罗志军;聂开瑜;金文虎;;游离皮片移植修复阴囊撕脱伤对精子发生影响的实验研究及临床观察[A];中国药理学会第七届全国生殖药理学术交流会论文摘要汇编[C];2011年
9 桂耀庭;唐爱发;余振东;张立兵;张键荣;李贤新;蔡志明;;精子发生相关基因的筛选和功能研究[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
10 王玉凤;朱朝兵;;罗氏沼虾精子发生超微结构的研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李慕军;不同类型精子发生障碍全基因组甲基化差异分析与重要功能基因的表达验证[D];广西医科大学;2012年
2 邢俊;VAMP4在精子运动中的功能研究[D];南京医科大学;2009年
3 葛少钦;十足目甲壳动物精子发生及顶体反应过程中碱性蛋白和乙酰化H4蛋白的变化[D];河北大学;2008年
4 刘边疆;人类精子中电压依赖性阴离子通道蛋白的基础和临床研究[D];南京医科大学;2011年
5 沙家豪 ;人类睾丸cDNA array制备及睾丸发育/精子发生相关基因表达谱系构建[D];南京师范大学;2003年
6 周作民;人睾丸发育/精子发生相关基因的研究[D];南京师范大学;2003年
7 邱为民;小鼠znf230和人TCP11基因的克隆和功能研究[D];四川大学;2004年
8 刘顺利;鼠精子纤维鞘蛋白FSCB的磷酸化在获能和超活化中的作用研究[D];第三军医大学;2012年
9 马静;Smads在肾阳虚大鼠精子发生中的作用及温阳生精汤对Smads表达的影响[D];第四军医大学;2005年
10 鲁爽;精子发生过程中组蛋白H2A.H2B编码及功能研究[D];中国协和医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李鸿岩;绵羊精子冷冻前后差异蛋白质组学研究[D];甘肃农业大学;2011年
2 晏正碧;稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)精子发生的初步研究[D];西南大学;2011年
3 鲁可可;人类hUFP基因初步研究[D];南京医科大学;2004年
4 袁娲;NORPEG基因不同转录本在人睾丸中的表达研究[D];南京医科大学;2005年
5 曹志国;睾丸特异蛋白GGN1与GGNBP2的相互作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
6 张立飞;4种十足目甲壳动物精子发生的比较研究[D];浙江大学;2003年
7 任艳玲;孕酮、γ-氨基丁酸诱发马鹿精子顶体反应及对离子转运调节的研究[D];东北林业大学;2006年
8 余周;细胞凋亡抑制因子survivin在精子发生过程中的作用研究[D];重庆医科大学;2007年
9 杨立;“生精宝”对小鼠少精子症模型的作用及机理探讨[D];昆明医学院;2008年
10 柳强;奶牛X-,Y-精子抑制消减文库的构建[D];内蒙古农业大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 师巧梅;我区成功使冷冻32年绵羊精子受胎产仔[N];新疆日报(汉);2010年
2 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市人类精子库 杜宏伟 上海市男科学研究所 李铮;人体最激情的舞者——精子[N];东方早报;2011年
3 刘长亮;“附睾炎致不孕”内幕揭秘[N];农村医药报(汉);2008年
4 易善永;治疗不孕为何还要先避孕[N];健康报;2006年
5 段恩奎;人造精子用于临床不能过于乐观[N];科技日报;2006年
6 杨孝文;揭开海马的繁衍生息之谜[N];中国渔业报;2007年
7 省畜牧局高级畜牧师 王学君;采精公猪常见问题的解决办法(下)[N];河南科技报;2006年
8 ;前列腺炎导致不育怎么办?[N];乐山日报;2006年
9 冯桃莉;避孕套能治不孕症?[N];大众卫生报;2004年
10 华中农业大学 彭健 博士;凭借什么让猪繁殖高效?[N];中国畜牧兽医报;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978