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燕麦成熟胚组织培养及再生体系建立

罗志娜  
【摘要】:燕麦是禾本科燕麦属一年生草本植物,具有很高的饲用和食用价值。本试验以白燕2号、陇燕3号、丹麦444的成熟种子为材料,通过对不同外植体、培养基、基因型、激素种类和浓度配比等方面的研究,探索影响燕麦愈伤组织诱导、继代、分化的因素,建立高频的燕麦再生体系。研究结果如下: 1、以成熟胚、下胚轴、幼叶为外植体研究了其对出愈率的影响,结果表明:以成熟胚为外植体诱导的愈伤组织出愈率最高,为76.11%,愈伤组织状态最优。 2、通过对MS、MB、N6基本培养基的比较试验发现,MS培养基作为基本培养基对燕麦愈伤组织诱导效果最佳,出愈率最高,为40.74%,愈伤组织结构紧密、生长速度快。 3、用无菌水、CaCl2、4℃低温和PEG对燕麦种子进行预处理,结果发现,种子预处理以无菌水浸泡最佳,简单有效。 4、盾片放置方式对愈伤组织诱导率的影响极显著,燕麦成熟胚盾片向下直接接触培养基,有利于愈伤组织的诱导,愈伤组织的诱导率提高了21%。 5.基因型和培养基之间存在互作关系,不同基因型在同种培养基的出愈率不同,同一基因型在不同培养基的出愈率也存在很大差异,白燕2号和陇燕3号在处理8上的出愈率最高,分别为63.33%和98.33%,丹麦444在处理1和处理6上的出愈率最高,为100%,处理6上诱导的愈伤组织为非胚性愈伤组织,不能分化出胚性苗。 6.白燕2号愈伤组织分化时,细胞分裂素与生长素的比例以3:1为宜,陇燕3号和丹麦444在细胞分裂素与生长素比值为2:1时分化率最高,分别为52.38%和61.54%。 7.通过激素种类及其浓度配比的研究,筛选出了燕麦成熟胚愈伤组织诱导和继代培养的最佳培养基,白燕2号和陇燕3号适宜的诱导培养基为MS+4mg/L2,4-D+1mg/LNAA,丹麦444适宜的诱导培养基为MS+2mg/L2,4-D,继代培养基为MS+1.5mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA+1.0mg/L6-BA。 8.通过系统研究,筛选出了不同燕麦基因型的最佳分化培养基,白燕2号的最佳分化培养基为MS+0.4mg/LNAA+0.2mg/LKT+1.0mg/L6-BA;陇燕3号的最佳分化培养基为MS+0.8mg/LNAA+0.8mg/LKT+1.0mg/L6-BA;丹麦444的最佳分化培养基为MS+0.2mg/L NAA+0.4mg/L KT。生根壮苗培养基为1/2MS无激素培养基。 9.对再生频率的研究结果表明,3个基因型中陇燕3号的再生频率最高,为61.56%,可用于燕麦再生体系的建立和进一步的遗传转化。


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