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核桃外植体褐化影响因素及增殖培养研究

王延秀  
【摘要】: 核桃(Juglans regia L.)别名胡桃、羌桃,属核桃科(Juglandacea)核桃属(Juglans)植物,是一种优良的干果树种,具有极高的经济价值。本试验以甘肃山核桃(Juglans regia L.)、美国黑核桃(duglans negro L.)、绵核桃、薄皮核桃、露仁核桃为试材,对外植体褐化的影响因子、初代培养、继代培养各个方面进行了研究,并对生根培养进行了初步的探讨。 核桃外植体的褐化受多种因子的影响:取材时间明显影响外植体的褐化率,在生长季中8月份褐化率最低,7月份褐化率最高;基因型也明显影响褐化率,黑核桃的褐化率在生长季极显著的高于山核桃,露仁核桃的褐化率也明显高于绵核桃;取材树的树龄越小,褐化率越低;随消毒时间的增长,褐化率升高,0.1%的HgCl_2溶液消毒8分钟时褐化率、污染率均较低,8分钟以上则加重褐化;褐化率与PPO活性的相关性不显著;褐化率与酚类物质含量呈极显著的正相关(R=0.791**);Vc能明显的降低褐化率并减轻褐化发生的程度。无菌外植体建立时,山核桃在5月中旬新梢速长前期、黑核桃在8月中旬新梢二次速长期分别采集当年生新梢,用流水冲洗后先依次在70%酒精中浸泡10秒钟、0.1%HgCl_2中浸泡8分钟,两种核桃分别取得了51.62%和42.68%的成活率。绵核桃、薄皮核桃、露仁核桃实生苗使用0.1%HgCl_2分别消毒6分钟、4.5分钟、4.5分钟,取得了85%、67%、40%的成活率。 将无菌保存的材料接种在DKW+1.0mg/L BA+0.01mg/L IBA培养基上相比于相同激素配比的H培养基,芽萌动早,而且长的快,褐化率低。但不同品种之间的萌动开始期和生长势有明显的差异。绵核桃、山核桃萌动早、生长快,露仁核桃萌动最迟、长势差,黑核桃和薄皮核桃介于两者之间。 继代培养选用DKW培养基,增殖效果好于MS和H培养基;BA在嫩茎的增殖中不可缺少,其浓度在0.5-1.0mg/L时增殖效果较好;低浓度的IBA对BA的增殖有促进作用。在DKW培养基上附加BA1.0mg/L、IBA0.01mg/L取得了最高的增殖倍数。接种材料的大小明显影响褐化率和增殖倍数,以1.8cm左右最为适宜。增殖培养时,前期采用较低温度(22℃),中期(25-26℃)、后期(28 C)采用较高温度,能明显的促进生长,使增殖倍数上升到4.6。继代周期35 d,适当延长后期的高温阶段,可以显著的增加增殖倍数达到4.8。 用 D邯附加 BAO.25mg/L、IBAO.03。g/L进行壮苗培养,取得了生长整齐健 壮的试管苗。


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