Leptin对雌性大鼠下丘脑—垂体—性腺轴作用的分子机理研究

【摘要】： 本研究以雌性大鼠为实验模型，采用原位杂交技术和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法，探讨了Leptin对下丘脑-垂体-性腺轴作用的分子机理。研究包括三个部分： 一、Leptin长型受体(Ob-Rb)mRNA在下丘脑、垂体和卵巢中的表达及其分布定位 本文用地高辛标记核酸原位杂交技术，探讨了15只雌性大鼠下丘脑、垂体和卵巢内Leptin长型受体(Ob-Rb)mRNA的表达及其分布定位。实验结果表明： 1．Ob-Rb mRNA在大鼠下丘脑广泛分布和表达，在弓状核、室旁核、室周核和腹内侧核有高度表达，其结果与其它研究结果基本一致，进一步肯定了别人的研究结果。但也见Ob-RbmRNA在下丘脑背侧核和外侧区有高度表达，弥补了大鼠下丘脑内Leptin长型受体分布资料的空白。 2．Ob-Rb mRNA广泛分布于大鼠垂体远侧部、中间部和神经部的嗜色细胞内。远侧部中嗜酸性细胞和嗜碱性细胞内有Ob-Rb mRNA黄褐色阳性颗粒分布，嫌色细胞内没有Ob-Rb mRNA黄褐色阳性颗粒分布。垂体中间部的嗜碱性细胞内有Ob-Rb mRNA黄褐色阳性颗粒分布，且密集分布。垂体神经部也有Ob-Rb mRNA黄褐色阳性颗粒分布，但集中在神经末梢、神经纤维和毛细血管周围细胞中。其结果为大鼠垂体内Leptin长型受体分布提供了详细资料。 3．Ob-Rb mRNA在大鼠卵巢中，主要分布于黄体细胞以及黄体、初级卵泡、生长卵泡和成熟卵泡周围基质颗粒细胞内，在黄体中，黄体细胞上有黄褐色阳性颗粒密集分布；在基质等其他部位中未能检测到Ob-Rb mRNA杂交信号。其结果为大鼠卵巢中Leptin长型受体分布提供了详细资料。 以上研究说明：Leptin长型受体对大鼠下丘脑-垂体-性腺轴存在着生理调控作用，为理解Leptin及其受体在动物体内所发挥的生理功能，提供了形态学基础。 H、核配原 结果的救量化处理方法的建立与大民下丘朕、垂体的Oh－Rb ’Intri A表达量的分析 本文用原位杂交技术探讨了鼠垂体内 LePtePtin长型受体（Oh－Rb）mRNA的 表达。并在侧脑室中分别注射 lP g Leptin和 illg生理盐水情况下，计算了大 鼠下丘脑、垂体 ObRb mRNA的阳性反应颗粒的积分光密度，来比较实验组。 对照组和空白组的阳性反应强度。结果表明：大鼠0卜mm RNRNA在下丘脑和垂 体内广泛分布和表达。注射 Laptin后，OB－R mRNA表达量上升（P＜0刀 1人 LePtin可直接在大鼠下丘脑和垂体内发挥生理的作用，其作用的大小与 ObR的mRNA表达量有关。 三、恻脑室注射L叩tin对大鼠下丘脑POMC、NPY、GnRll、ObR mRNA 及垂体 LH和 GH mRNA表达的彤响 本文探讨了Leptin对大鼠下丘脑中前阿黑皮素（POMCX神经肽Y（NPY） 促性腺激素释放激素（GM）mRNA以及垂体中促性腺檄素（LH）和生长激 素（GH）表达的影响。 选择体重180—2009的雌性SD大鼠15只，随机分成3组即：Leptin注射 组、生理盐水注射组和空白对照组，每组5 只。采用逆转录多聚酶链反应 （RT－PCR）的方法，分别测定了大鼠下丘脑 POMC、NPY、GnRH、ObR mRNA 及垂体 LH和 GH mRNA表达水平。实验结果表明： 在大鼠侧脑室注射 Leptinl g后，POMC基因表达量上升，Leptin注射 组与生理盐水注射组和空白组之间差异显著（P＜0乃1），而生理盐水注射组与空 白组之间差异不显著（P＞0．05人 ObR InRNA表达量也上升，Leptin注射组与 生理盐水注射组和空白组之间差异显著u＜0刀1），而生理盐水注射组与空白组 之间差异不显著（P＞0．05L NPY基因表达量下降，Leptin注射组与生理盐水 注射组和空白组之间差异显著（P＜0刀 1），而生理盐水注射组与空白组之间差异 不显著（P＞0刀5人GnRH基因表达量下降，Leptin注射组与生理盐水注射组和 空白组之间差异显著（P＜0刀1），而生理盐水注射组与空白组之间差异不显著 （P＞0．05人垂体的LH和GH基因表达量均上升，Leptin注射组与生理盐水注 2 射组和空白组之间差异均显著（P＜0刀1），而生理盐水注射组与空白组之间差异 均不显著（P＞0刀5）。 由此可得出结论：Leptin在大鼠下丘脑POMC、NPY、GlRH和Oh－R以 及垂体LH和GH的调控功能中起着重要作用。