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囊胚注射转基因ES细胞制作嵌合体的研究

付志新  
【摘要】: 嵌合体小鼠的制作是判定胚胎干细胞系是否具有种系分化能力的唯一方法,其在胚胎干细胞系的建立、外源基因导入胚胎干细胞、种系嵌合体的获得中处于重要的地位,也是通过胚胎干细胞途径得到转基因小鼠的关键环节。本实验在小鼠胚胎成纤维细胞制作的饲养层上培养并成功的维持了携带LacZ基因的胚胎干细胞系(S_8),在此基础上,以S_8为供体细胞,以远交系昆明白小鼠3.5d胚胎为受体。通过显微注射法将供体细胞转移到受体的囊胚腔内,经过恢复培养,移植到代孕鼠昆明白雌鼠的子宫中;后代在嵌合体出生一周后进行判定。本实验用8-13代的S_8细胞共注射胚胎597枚,经1—3小时恢复培养,有585枚胚胎重新具有膨大的囊胚腔,细胞轮廓分明,滋养层细胞间连接也清晰可见,胚胎成活率为97%;胚胎移植后,代孕母鼠共移植胚胎228枚,经17-19天的妊娠期后,产仔37只(2只死胎),产仔率为16%;有35只仔鼠(雄鼠18只,雌鼠17只)存活到可以判断毛色,共获得8只S_8细胞毛色嵌合体小鼠,嵌合体的产生率为21.6%。结果表明用S_8细胞经囊胚注射后能够获得嵌合体,并且嵌合体明显发生了性偏离现象。本实验为国内利用囊胚注射携带LacZ基因的胚胎干细胞获得嵌合体小鼠的首例报道。


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