波德代与陶塞特品种绵羊精子冷冻损伤及其凝集素标记特征的研究

【摘要】：本研究对波德代品种绵羊和陶塞特品种绵羊精子进行冷冻／复温后，测定了其精清中酶、微量元素的变化，对冷冻精子观察了获能前后其膜、DNA的损伤情况，并对冷冻精子获能前后的凝集素标记特征进行了研究。研究结果表明： 绵羊精子经冷冻／复温之后，其精清中一氧化氮合成酶(NOS)和谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase, GS)的含量分别有显著的增加(P＜0.05)；谷胱甘肽S转移酶(GSH-ST)、碱性磷酸酶(AKP)、透明质酸(SA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、胆碱酯酶(choline esterase, CHE)和γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)的含量虽呈降低趋势，但由于结果不显著(P＞0.05)，故只能说明这几种酶的变化可能代表着精子生理生化功能的改变，具体还需进一步的研究证实；β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(acetylamihoglucosidase, NAG)的含量及酸性磷酸酶(acid phosphatase, ACP)的含量没有明显的变化趋势，提示此两种酶可能在此过程中没有受到相关的影响。精子经冷冻／复温后其精清中的Ca、Mg含量变化没有明显的规律，其含量变化趋势尚不能确定，但由于其含量在精子获能及受精方面的重要性建议将其与冷冻精子的获有能力联系起来研究；Na、Cl和K的含量均呈降低趋势。此外，本试验还观察到精子经冷冻／复温后其精清中的P含量有增加的趋势。 用精子尾部低渗膨胀实验评定精子膜的完整性，将精子尾部的低渗膨胀类型分为“g”型弯曲精子和一般弯曲类型的精子，结果表明采用“g”型弯曲精子的比例来评定精子膜功能比较合理一些；采用钙离子载体A23187进行绵羊冷冻精子的体外获能诱导，结果表明用钙离子载体A23187进行体外获能诱导的效果是非常明显，是一种合适的精子体外获能方法；用考马斯亮蓝对获能前后的精子进行检测，精子可分为两类，一类是未染色或着色较淡的，本研究建议将获能后A类精子与获能前A类精子的差值做为对获能率的评价。结果表明绵羊冷冻精子在获能后，获能对精子膜的完整性没有影响。 采用精子单细胞凝胶电泳方法检测精子DNA的损伤情况，结果表明通过对绵羊冷冻精子进行体外获能诱导后，其DNA可能不会产生损伤，且用单细胞凝胶电泳法检测绵羊体外诱导获能冷冻精子DNA损伤的结果没有品种差异。 通过对绵羊冷冻精子经体外获能诱导后凝集素的标记特征进行研究，结果显示Con A和麦芽凝集素的标记经有所加强，但二者的加强程度不同，鉴于此结果于前人研究较相 摘要.2. 似，故建议将其做为精子获能的参考性标志之一;通过对Lentil和Horse gram在绵羊 冷冻精子表面获能前后的标记特征研究的结果表明，获能前有部分精子表面均呈Lentil 标记阳性，但均为弱标记，尾部的标记强度略高一些。获能后有部分精子头部的标记强 度稍有所增加，尾部标记强度没有变化。获能前后精子表面均呈Horse gram标记阳性， 其中头部呈弱标记，尾部呈强标记。获能后，头部与尾部的标记强度均未有所变化。 关键词:绵羊，精子，冷冻损伤，酶，微量元素，凝集素