甘蓝型油菜新型不育系mtDNA的RAPD分析

【摘要】：本研究采用RAPD 标记技术对7 份甘蓝型油菜细胞质雄性不育材料和3 份保持材料mtDNA进行了多态性分析和聚类比较,以确定这7 份不育材料分类地位,研究结果如下: 1 实验材料的聚类分析结果: 由mtDNA 的RAPD 分析的聚类结果,可将10 份实验材料在遗传距离为0.1186处聚为5 组: Ⅰ:Pol 2A、Pol 3A、Pol 1A; Ⅱ:L04-02A、L04-05A、L04-01A; Ⅲ:L04-01B、Pol3B; Ⅳ:L04-04B; Ⅴ:0053A。 从聚类分析结果可以看出,胞质来源相同或形态相似的材料聚在一起,第Ⅰ组由来源于Pol CMS 的3 份不育系构成;第Ⅱ组由来源于Cooktail、Synery和PF 的不育株育成的不育系构成,它们都属于大花瓣、无粉型;第Ⅲ组和第Ⅳ组为保持系;第Ⅴ组为Ogu CMS。实验表明第Ⅱ组材料L04-02A、L04-05A、L04-01A为同一类型的细胞质雄性不育系,它们与Pol CMS 和Ogu CMS 有很大的差异,是一种新型甘蓝型油菜不育系。该组不育材料有一条大小为S146?650bp 的条带,可将该组材料和其它不育系细胞质区分开来。 2 mtDNA的RAPD分析结果: 利用23 条具有较好多态性的引物以及优化的RAPD体系进行实验材料的RAPD分析,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,均得到了清晰的DNA扩增图谱,且重复性较好。扩增共获得132 条清晰的多态性带,每个引物扩增出3~9 条带,平均6 条带。 3 线粒体DNA 的提取与纯化方法研究: 1)离心力研究表明,分离线粒体时,分离细胞破碎组织时的离心力、线粒体分离时的离心力、线粒体纯化时的离心力分别为1000g、20000g、18000g时,线粒体产量高,而且从中提取到了丰富的mtDNA; 2)实验表明,提取mtDNA 过程中,用新鲜材料提取的mtDNA 纯度高无降解,而冻样则有降解现象,所以mtDNA提取最好使用新鲜材料; 3)缓冲液C 的用量表明,一般25ml~30ml 蔗糖衬垫液C 中可加入约10g新鲜叶片中所得到的线粒体,这样分离到的线粒体比较纯,进一步可获得纯的mtDNA;