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羊痘病毒结构蛋白P32基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

马维民  
【摘要】: 羊痘(Capripox)是由羊痘病毒(Capripoxvirus)引起的绵羊(Sheep)和山羊(Goat)的一种急性、热性、接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,在我国被列为一类传染病。羊痘病毒属痘病毒科(poxvirdae)、脊椎动物痘病毒亚科(chordopoxvirnae)、羊痘病毒属(capripoxvirus)的成员。羊痘病毒P32蛋白是目前世界各地分离、鉴定的所有羊痘病毒毒株所共有的且特异性很强的羊痘病毒结构蛋白,是位于羊痘病毒膜表面的主要结构蛋白,含有中和抗原表位。 本研究应用PCR技术,用特异性引物扩增出羊痘病毒结构蛋白P32基因,连接于pMD18-T载体,随后以重组质粒为模板用另一对特异性引物扩增得到目的基因(855bp),对目的基因和表达载体pET-30a,pGEX-4T-1分别以相同的限制性酶酶切后,构建成重组表达载体,经PCR、酶切鉴定和测序,证明成功构建了重组表达载体pET-P32和pGEX-P32。经IPTG诱导,该片段在大肠杆菌中均得到表达,表达蛋白分子量分别约为37.5 ku和57 ku。重组表达载体pGEX-P32表达产物能够与羊痘血清反应,说明P32具有反应原性。本实验为以后更进一步研究P32的结构与功能、建立羊痘的诊断检测方法和亚单位疫苗的研制奠定了基础。


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