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红车轴草总黄酮抗氧化作用及其对免疫功能的影响

刘宝剑  
【摘要】: 红车轴草(Trifolium pratense L.)为豆科多年生草本植物,是我国主要的牧草植物之一。红车轴草含有黄酮类、蛋白质、氨基酸、糖类和维生素等多种成分,其中黄酮类物质总含量约占干重的2%。黄酮类物质中的异黄酮主要是鹰嘴豆芽素A(Biochanin A)、芒柄花素(Formononetin)、染料木素(Genistein)和大豆黄素(Daidzein)等4种,研究证明红车轴草异黄酮具有弱的雌激素样作用和促进动物生长、抑制癌细胞的生长及改善动脉血管的柔软性等多种生理功能,但对其抗氧化活性及对机体免疫功能的影响研究较少。因此,本实验对红车轴草总黄酮的抗氧化作用以及对机体免疫功能的影响进行了研究。 应用超声-微波协同萃取技术,用80%乙醇做溶媒,提取红车轴草总黄酮。采用Fenton反应产生羟自由基(·OH)、邻苯三酚自氧化产生超氧阴离子(O2-.)模型,检测红车轴草总黄酮体外清除自由基的作用;采用分光光度法测定H2O2诱导红细胞溶血作用,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定小鼠红细胞膜脂质及肝组织匀浆脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量;通过迟发变态反应试验、炭粒廓清试验、免疫器官脏器指数试验研究红车轴草总黄酮对小鼠免疫功能的影响。研究结果如下: 1.红车轴草总黄酮在6.25~200 mg/mL范围内具有清除Fenton反应产生·OH的作用,在6.25~100 mg/mL浓度范围内对邻苯三酚自氧化产生的O2-.具有清除作用,直线回归方程分别为Y = 18.699 + 0.395X(r2 = 0.843),Y = 13.82 + 0.663X(r2 = 0.997),表明二者均呈明显的量效关系,其对·OH(IC50)和对O2-.半数清除浓度(IC50)分别为44.06 mg/mL和54.57 mg/mL。表明红车轴草总黄酮体外具有较好的清除自由基作用。 2.红车轴草总黄酮在0.025~0.2 mg/mL范围内能抑制H2O2诱导红细胞溶血和红细胞膜脂质过氧化作用,直线回归方程分别为Y = 12.393 + 322.661X(P 0.05,r=0.970,r2=0.942)、Y = 21.284 + 249.847X(r = 0.989,r2 = 0.978),IC50分别为0.0910 mg/mL和0.0905 mg/mL,均表现较好的量效关系;红车轴草总黄酮在0.10~0.78 mg/mL范围内可以抑制肝组织脂质过氧化产物的形成,曲线拟合Y = 76.472– 4.628/X(r2 = 0.990),IC50为0.174 mg/mL。表明红车轴草总黄酮体外具有明显的抗氧化作用。 3.以小鼠迟发变态反应试验、炭粒廓清试验、免疫器官脏器指数试验,测定红车轴草总黄酮对免疫功能的影响。结果表明,随着红车轴草总黄酮浓度的增大,小鼠足跖增厚逐渐增加,与对照组比以50 mg/mL浓度组增加显著(p 0.05);小鼠炭粒廓清试验表明,50 mg/ml和20 mg/ml浓度组与对照组比较均能显著增强小鼠炭粒廓清能力(P 0.05);脾脏指数和胸腺指数随着红车轴草总黄酮浓度的增大有增加的趋势,但没有统计学意义(P 0.05)。说明红车轴草总黄酮在适宜浓度范围内具有增强小鼠免疫功能的作用。


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