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兰州百合不同外植体培养及其优化研究

刘雅楠  
【摘要】: 兰州百合属川百合的变种,是多年生草本植物,营养丰富,品质极佳,以名菜良药著称全国,是百合中的佼佼者。关于百合的组织培养,目前有大量的报道,但是关于兰州百合的组织培养,报道较少,尤其是兰州百合的幼胚离体培养目前尚未报道。本实验分别在无性系的建立,继代增殖培养,生根培养三个阶段选用兰州百合的鳞片、根、叶片、胚作为外植体进行组织培养的研究。 筛选出适合兰州百合离体培养的最佳灭菌方式:饱和洗衣粉—无菌水冲洗—70%无水乙醇处理1-2分钟—无菌水冲洗—15%84消毒液处理15分钟—0.1%升汞处理5-6分钟—无菌水冲洗3遍。用同样的灭菌方式对兰州百合鳞片的内层,中层,外层进行灭菌,内层易灭菌,外层鳞片最不易灭菌。 在进行初代培养的过程中,兰州百合以鳞片为外植体的初代培养过程中,最佳培养基为MS+ 1.0mg/L BA + 0.2 mg/L NAA,低温处理对鳞片的初代培养分化率明显的高于未经过低温处理的鳞片。兰州百合以根为外植体的初代培养的过程中,最佳培养基为:MS+2.0mg/L BA +0.2 mg/L NAA,MS+2.0mg/L BA +0.1 mg/L NAA。兰州百合以叶片为外植体的初代培养的过程中,最佳培养基为:MS+1.0mg/L BA +0.2 mg/L NAA,MS+1.0mg/L BA +0.1 mg/L NAA。以兰州百合幼胚为外植体的初代培养,通过生物统计学分析,所有初代培养成功的幼胚,均属于随机出现,与培养基没有直接关系。并且低温处理对胚的萌发没有影响。相同的培养基,当蔗糖的浓度达到60%时,幼胚的萌发率高达50.7%。 在进行增殖培养过程中,兰州鳞片增殖培养基中最佳培养基为MS+0.5 mg/L BA +0.5 mg/L NAA,兰州百合叶片增殖培养基中最佳培养基为MS+2.0 mg/L BA +0.4 mg/L NAA。兰州百合根增殖培养基中最佳培养基为MS+1.5mg/L BA +0.5 mg/L NAA,较适合兰州百合胚成苗的培养基为MS+1.0 mg/L BA +0.1 mg/L NAA。 在进行生根培养的过程中,鳞片生成的不定芽进行生根结鳞茎的培养中最佳培养基为1/2 MS+ 0.2 mg/L NAA +蔗糖60g/L,根生成的不定芽进行生根结鳞茎的培养中最佳培养基为1/2 MS+ 0.3 mg/L NAA +蔗糖60g/L,叶片生成的不定芽进行生根结鳞茎的培养中最佳培养基为1/2 MS+ 0.3 mg/L NAA +蔗糖60g/L。 初代培养基对外植体分化的影响:鳞片下部的分生能力极显著的高于其他部位。叶片基部的分生能力极显著的高于叶片的中段和叶尖。来自于根基部的分生能力极显著的高于根中部和根尖部。 继代培养基对外植体增殖的影响:鳞片下部产生的不定芽的增殖能力最强,来自根基部的芽增殖倍数极显著地高于根中部和根尖,叶片基部的芽极显著地高于叶片中部和叶尖。 生根培养基对外植体诱导生根的影响:来自鳞片下部的单株根的生长状况最好。


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