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骨痹止痛液对大鼠膝骨性关节炎软骨中BMP2和SOX9表达影响的实验研究

刘学睿  
【摘要】:目的:本研究以SD大鼠为研究对象,通过动物实验,旨在观察骨痹止痛液对大鼠膝骨性关节炎关节软骨中BMP2和Sox9表达的影响,以此探讨骨痹止痛液对骨关节炎关节软骨的保护作用。方法:SPF级SD大鼠90只,雌雄各45只,体重280±20g,随机抽取15只大鼠作为假手术组,余75只大鼠采用改良Hulth法行膝骨关节炎造模,造模成功后,随机分为模型组、骨痹止痛液低、中、高剂量组和硫酸氨基葡萄糖片组,每组均有大鼠15只,组间雌雄分笼饲养。药物连续干预8周后,用脱颈法处死每组大鼠,取各组大鼠膝关节软骨,用肉眼观察大鼠软骨大体形态学改变,并于光镜下观察各大鼠HE染色的病理变化,然后采用RT-PCR技术检测软骨中BMP2mRNA及Sox9 mRNA的表达情况。结果:(1)肉眼大体形态观察:假手术组关节表面光滑,关节软骨的外观及颜色正常,关节面透明完整,无关节面溃疡,无软骨下骨质暴露,无增生变化,同正常膝关节软骨表面。模型组关节表面不光滑,粗糙不平,关节软骨色泽暗淡无光泽,软骨透明度明显降低,软骨出现糜烂、剥脱,有软骨缺损并关节边缘大量骨赘形成,滑膜增厚,软骨下骨质暴露;骨痹止痛液(低、中、高)剂量组和硫酸氨基葡萄糖片组软骨透明度较模型组高,软骨表面欠光滑,个别区域颜色偏暗。其中骨痹止痛液低剂量组关节面有糜烂,有部分软骨缺损和少量骨赘形成,中、高剂量骨痹止痛液组和硫酸氨基葡萄糖片组无软骨缺损及骨赘新生物。(2)HE染色:参照Mankins评分标准对HE染色进行比较,模型组与假手术组相比,假手术组软骨表面光滑,染色清晰,软骨表层、移行层、辐射层和钙化层清楚可辨,细胞排列整齐,层次清晰,染色质分布均匀,细胞核清晰可见。模型组软骨表面粗糙,表层变薄甚至消失,部分区域有绒毛状表现,裂隙较多可达深层,部分区域的细胞核固缩、坏死,钙化层细胞紊乱排列呈簇状,潮线不完整或消失,两组Mankins评分比较有统计学意义(P0.05)。骨痹止痛液各剂量组和硫酸氨基葡萄糖片组软骨组织损伤程度好于模型组,但比假手术组损伤程度严重,不规则排列的软骨细胞在部分区域仍可见,但相比模型组少见,各层界限仍欠清楚,镜下个别区域存在簇集现象,基质染色较均匀,个别潮线不完整,骨痹止痛液各剂量组和硫酸氨基葡萄糖片组与模型组评分比较有统计学意义(P0.05)。(3)PCR检测:与模型组相比,骨痹止痛液低、中剂量组大鼠软骨标本中BMP2、Sox9 mRNA表达量有所升高,但无统计学意义(P0.05),骨痹止痛液高剂量组及硫酸氨基葡萄糖片组大鼠软骨标本中BMP2 mRNA、Sox9 mRNA表达量明显升高(P0.05);骨痹止痛液高剂量组与低、中剂量组比较,软骨标本中BMP2、Sox9 mRNA表达量升高明显(P0.05)。结论:(1)骨痹止痛液可上调大鼠KOA模型膝关节软骨中BMP2、Sox9含量的表达,影响OA关节软骨的病理改变,从而减轻关节损伤,保护关节软骨,延缓OA病情的进展。(2)高剂量骨痹止痛液软骨修复效果更显著。


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