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红芪多糖对糖尿病心肌病db/db小鼠心肌细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白及基因表达的影响研究

王栋  
【摘要】:目的:通过观察红芪多糖(HPS)对糖尿病心肌病(DCM)db/db小鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白及基因表达的影响,探讨红芪多糖对DCM小鼠心肌病变的作用机理。方法:根据体重大小,根据随机数字表将60只6周龄雄性db/db自发型糖尿病小鼠随机分为5组:HPS高、中、低剂量实验组分别给予HPS 200,100,50 mg﹒kg~(-1)﹒d~(-1)混悬液灌胃;对照组给予罗格列酮混悬液4 mg﹒kg~(-1)灌胃;模型组给予同等剂量0.9%生理盐水0.2 mL﹒d~(-1)灌胃;正常组不干预。连续干预8周。于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测各组空腹血糖与体重;于第8周末进行取材,将所有小鼠处死后取出心脏,留取左心室组织,并留取部分心肌组织以组织固定液固定后,使用HE染色法与Masson染色法观察心肌组织病理情况,使用Western blot法检测心肌组织中Bax、Bcl-2以及Caspase-3蛋白表达,使用RT-PCR法检测心肌组织中Bax、Bcl-2以及Caspase-3的mRNA表达。结果:1.体重检测显示:经过8周干预治疗后,与正常组相比,模型组体重明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,HPS高、中、低剂量实验组与对照组体重虽有下降,但无统计学意义。2.血糖检测显示:经HPS治疗8周后,与正常组相比,模型组、HPS高、中剂量实验组和对照组血糖明显升高,差异具有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,HPS高、中剂量实验组和对照组血糖下降明显,差异有统计学意义(P0.01);3.HE染色显示:HE染色可见模型组心肌细胞结构模糊,部分区域明显肿胀变形且细胞核消失,HPS高剂量组与对照组细胞结构与形态改善明显,细胞凋亡减少;4.Masson染色显示:模型组心肌细胞出现肥大坏死,心肌纤维化明显,HPS高剂量组细胞坏死与排列紊乱明显改善,心肌纤维化明显改善。5.Western blot法检测显示:与正常组相比,模型组的Bax与Caspase-3蛋白表达均明显上升,Bcl-2蛋白表达明显下降。与模型组相比,HPS高、中剂量实验组及对照组Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达明显降低(P0.05),与模型组相比,HPS高、中剂量实验组及对照组Bcl-2蛋白表达明显增高(P0.05),其中HPS高剂量实验组和对照组改善更明显(P0.01),差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。6.RT-PCR法检测显示:与正常组相比,模型组Bax与Caspase-3的mRNA均明显上升,模型组Bcl-2的mRNA明显下降。与模型组相比,HPS高、中剂量实验组及对照组Bax的mRNA显著下降(P0.05),HPS高、中剂量实验组及对照组Caspase-3的mRNA显著下降(P0.05),HPS高、中剂量实验组及对照组Bcl-2的mRNA明显上升(P0.05),其中HPS高剂量实验组和对照组改善更明显(P0.01),差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:HPS可以改善DCM情况下的心肌细胞异常凋亡,其机制可能与HPS增加DCM模型db/db小鼠心肌组织中Bcl-2表达,降低其Bax与Caspase-3的表达有关。


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