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从线粒体介导途径探讨黄芪多糖联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的影响

庄梦婕  
【摘要】:目的:通过观察黄芪多糖及联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、线粒体凋亡相关蛋白Caspase 3、Cyt C、Omi/HtrA2、Smac/Diablo、XIAP及线粒体超微结构的影响,从线粒体介导途径探讨黄芪多糖抑瘤、抗瘤的机制。方法:90只C57BL/6J小鼠,随机分为9组,正常组、模型组、APS低、中、高剂量组、DDP组、APS联合DDP低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余80只均接种LLC(1×10~7mL)于右前肢腋窝皮下,造模为荷瘤小鼠。造模次日起,治疗组的小鼠给予腹腔注射0.3mL药物。DDP每周注射1次,其余药物每天1次,正常组和模型组注射等体积生理盐水,治疗连续20d,并于第21天处死。观察指标(1)各组小鼠的一般情况;(2)体质量及瘤重;(3)HE染色观察移植瘤小鼠肺组织、肿瘤组织病理学变化;(4)免疫组化法检测移植瘤细胞中的Caspase 3、Cyt C、Omi/HtrA2、Smac/Diablo、XIAP的表达;(5)Western blot检测移植瘤细胞中的Caspase 3及Smac/Diablo蛋白的表达;(6)透射电镜观察肿瘤组织线粒体超微结构变化。结果:(1)与模型组相比,DDP组小鼠的体质量下降明显,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组相比,3 mg/kg DDP联合(100、200)μg/mL APS组的荷瘤小鼠肿瘤质量减轻显著,差异有统计学意义(P0.05);与DDP组相比,3 mg/kg DDP联合(100、200)μg/m L APS的荷瘤小鼠肿瘤质量减轻,差异有统计学意义(P0.05)。(2)肺组织HE显示:正常组肺组织结构完整;模型组的肺泡结构消失,肺充血严重;DDP组肺泡结构较为完整;3 mg/kg DDP联合(100、200)μg/mL APS组肺组织形态结构较为完整,肺局部充血,肺泡隔增厚。肿瘤组织HE显示:模型组的肿瘤细胞核大,肿瘤细胞染色深,周围没有坏死;DDP组的肿瘤细胞染色深,肿瘤细胞大片坏死和核固缩,碎裂;200μg/m L APS组联合3 mg/kg DDP组可见细胞坏死和核碎裂,固缩。(3)免疫组化表明:与模型组相比,各治疗组的肿瘤组织中Caspase 3、Cyt C、Smac/Diablo、Omi/HtrA2蛋白表达显著升高,与DDP组相比,DDP、3 mg/kg联合DDP200μg/mL APS组表达最明显,差异均具有统计学意义(P0.05或P0.01)。XIAP蛋白在模型组中呈阳性高表达;DDP及3 mg/kg DDP联合200μg/mL APS组的XIAP蛋白呈阴性表达,与模型组组比,差异均具有统计学意义(P0.05或P0.01)。(4)Western blot检测提示,与模型组相比治疗组Caspase 3、Smac/Diablo均有表达,其中DDP、200μg/mL APS联合3 mg/kg DDP组Caspase 3、Smac/Diablo表达显著增强。(5)电镜下观察线粒体形态的变化:模型组:肿瘤细胞线粒体结构清晰,可见线粒体嵴样结构,无肿胀、固缩,排列整齐,膜外形基本完整,线粒体密集,无线粒体空泡化结构。细胞核染色质分布均匀,核大,胞浆少;APS(50、100、200)μg/mL组:肿瘤细胞核染色质聚集,核大,胞浆少,胞浆内线粒体肿胀;DDP组:胞浆内线粒体肿胀,线粒体排列紊乱,膜模糊不清,嵴样结构错乱并消失,线粒体疏松溶解,线粒体内可见空泡形成;3 mg/kg DDP联合200μg/m L APS组:电镜下观察到线粒体的数目增加,细胞核染色质发生聚集,部分细胞出现凋亡,核大,胞浆少,胞浆内线粒体肿胀,线粒体固缩,嵴样结构错乱并消失,膜模糊不清,部分膜发生破裂,线粒体疏松溶解,线粒体内可见空泡形成。结论:APS及联合化疗药物DDP对小鼠移植瘤具有一定的抑制作用;APS及联合化疗药物DDP抑制小鼠移植瘤生长的机制可能与提高线粒体凋亡途径相关蛋白Caspase3、Cyt C、Smac/Diablo、Omi/HtrA2的表达,降低蛋白XIAP的表达有关。


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