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藏药唐古特红景天水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用

张树娜  
【摘要】:背景:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,居女性恶性肿瘤的首位。近年来,乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势,发病年龄也明显年轻化,严重威胁着妇女的健康。红景天(Rhodiola rosea L)具有延缓衰老、防辐射、抗缺氧、抗疲劳、抗肿瘤、增强免疫与抗病毒等多种保健功能,其主要的功能因子为红景天苷。细胞凋亡是一种由凋亡相关基因调控的自身程序化死亡,它是机体维持平衡的机制。现有的研究表明,细胞凋亡受阻或增殖失控参与肿瘤的形成,从凋亡的角度来看,肿瘤的发生是由于凋亡机制受抑制,不能正常适时地进行细胞死亡而清除变异细胞,肿瘤的不断生长是由于肿瘤细胞寿命的延长。凋亡的分子机制研究表明:天冬氨酸依赖的半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)家族是直接导致细胞凋亡的蛋白酶系统,在细胞凋亡机制网络中居中心地位。在caspase家族中,caspase-3处于蛋白酶级联反应的核心位置,在细胞凋亡信号传导过程中被其上游蛋白酶切割激活后能直接水解多种负责细胞生化和形态学改变的底物而致细胞凋亡。 目的:尽管唐古特红景天已被作为抗肿瘤应用在藏族医药,但唐古特红景天的抗肿瘤作用还不明确。本研究的目的在于研究唐古特红景天水提物的抗乳腺癌作用及其分子机制,为乳腺癌的治疗提供理论支持。 方法:利用高效液相色谱鉴定水提物的有效成分。采用MTT法检测不同浓度的唐古特红景天水提物处理MCF-7细胞12、24、48 h后细胞的存活率。光镜观察水提物处理后MCF-7细胞形态学的变化。使用Annexin V-FITC/PI双染色凋亡检测试剂盒,流式细胞术分析水提物对MCF-7细胞凋亡的影响。采用RT-PCR法检测不同浓度的唐古特红景天水提物处理MCF-7细胞后细胞中caspase-3基因表达的水平。 结果:高效液相色谱结果证实,唐古特红景天水提物中有红景天苷和酪醇等成份的存在。MTT实验结果显示,水提物作用12 h,便对MCF-7肿瘤细胞的增殖产生抑制作用;在不同的检测时间点,从90μg/mL到450μg/mL的剂量范围对肿瘤细胞的存活均有不同程度的抑制作用,且最高抑制率高达98 %。光镜观察发现,不同浓度的唐古特红景天水提物作用后可引起肿瘤细胞出现胞浆空泡和核固缩。AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞检测结果显示,低浓度的唐古特红景天水提物处理后,肿瘤细胞出现早期凋亡,随着药物浓度增高,凋亡晚期和坏死细胞增多。RT-PCR结果显示,在唐古特红景天水提物组中Caspase-3 mRNA表达增加。 结论:唐古特红景天水提物可抑制体外培养乳腺癌细胞MCF-7的增殖,其抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡的机制有关。


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