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独一味[Lamiophlomisrotata (Benth.)Kudo]的离体繁育及形态建成研究

马玉林  
【摘要】:独一味[Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo]为唇形科独一味属仅有的一种植物,是多年生草本植物,其全草入药,是我国藏、蒙、纳西等民族民间常用草药之一,具有较高的药用价值。本实验以野生独一味种子萌发后具出现真叶幼苗的幼叶、叶柄、幼根为外植体,通过对其愈伤组织诱导、继代培养、分化培养及其形态建成过程的观察,系统地分析了独一味脱分化和再分化的内部机制。旨在为独一味通过离体组织培养在快速无性繁育、次生代谢产物利用、无性系变异、品种选育等方面的研究提供理论依据和实践基础。 主要得到以下研究结果: 1.以筛选的MS培养基为基本培养基,在MS+2,4-D1.0mg·L~(-1)+6-BA0.5mg·L~(-1)+ NAA0.5mg·L~(-1)诱导培养基上以幼叶、叶柄及幼根为外植体进行培养,愈伤组织诱导率分别可达80.0%、70.0%和91.3%。; 2.继代培养时选用相同浓度的2,4-D、NAA和6-BA,独一味愈伤组织在MS上继代均优于B5、N6和MA;继代的最佳培养基为MS+2,4-D1.0mg·L~(-1)+6-BA0.5mg·L~(-1) +NAA0.5mg·L~(-1)+肌醇100mg·L~(-1)+CH300mg·L~(-1)+3%蔗糖;独一味愈伤组织生长呈“S”型曲线动态变化趋势,最佳继代时间为25天;光照培养对独一味愈伤组织的生长有促进作用;独一味愈伤组织继代培养的适宜温度为22℃。 3.以附加1.0 mg·L~(-1)6-BA和0.5mg·L~(-1)NAA的MS培养基作为分化培养基,不同类型的愈伤组织分化率不同,不定芽的分化最高可达85%;通过微枝扦插性方法进行快速繁殖,不定芽增殖倍数可达5倍以上。MS0培养基上的诱导生根效果最显著,生根率达100%;最终经过炼苗、移栽,成活率可达90%以上。 4.独一味体细胞胚胎诱导的最佳培养基为MS+2,4-D2.0mg·L~(-1)+6-BA0.5mg·L~(-1) +NAA0.5mg·L~(-1);2,4-D对独一味胚性愈伤组织形成是必需的,提高2,4-D浓度有利于体细胞胚胎的发生;蔗糖浓度3%时有利于独一味胚状体发生;水解酪蛋白的含量对独一味胚状体的诱导率和形成时间长短有影响; 5.独一味愈伤组织的形态发生与建成既有器官发生途径也有体细胞胚胎发生途径。独一味愈伤组织芽分化大多数为外起源,但也有内起源的。其体细胞胚胎发生与其它双子叶植物一样,经球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚四个明显的过程。独一味体细胞胚胎发生为典型的单细胞起源。其胚性原始细胞既有内起源,又有外起源。


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