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青藏高原卤虫孵化条件与遗传标记开发初探

刘海珍  
【摘要】:卤虫作为重要的基础实验材料和经济动物资源,研究其孵化条件和开发微卫星标记工具具有重要意义。本研究通过对柯柯盐湖卤虫卵的孵育实验,探索了柯柯盐湖卤虫发育对温度和盐度的耐受条件;基于FIASCO方法,构建青藏高原卤虫的(AC)n和(AG)n微卫星富集文库,并筛选6对微卫星引物,为卤虫资源评估和遗传分化研究等提供遗传标记工具。主要研究结果如下:1、25‰盐度是柯柯盐湖卤虫卵孵化和幼体发育的理想盐浓度。在7个盐度梯度中,随着盐度不断升高,柯柯盐湖卤虫卵的孵化率平均值呈现下降趋势;但盐度低于25‰时,卤虫卵虽可破膜,但无法发育为无节幼体,是无活力的破膜幼体,而当盐度为80%‰时,卤虫将不会孵化。2、在25‰盐度条件下,柯柯盐湖卤虫卵的最适孵化温度为26℃,以26℃为基点,随着温度上升或降低卤虫卵孵化率呈下降趋势;当温度上升到39℃或下降到13℃时,孵化率为0。3、挑取平板上的阳性克隆进行培养,分别从(AC)n文库和(AG)n文库中随机挑选120个和200个白色单菌落.以M13通用引物和对应探针序列(无生物素标记)进行PCR扩增,分别筛选到80个和120个可能含有微卫星序列的阳性克隆,经测序得到阳性克隆率分别为66.7%、60.0%。4、依据得到的微卫星序列,用Primer premier 5.0软件设计并合成引物63对,对2个地理单元(青海、西藏)的18个卤虫基因组DNA扩增,筛选出6对具有多态性的卤虫微卫星引物。


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