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唐古特大黄细胞悬浮培养及主要次生代谢产物积累的初步研究

舒孝和  
【摘要】: 以唐古特大黄子叶为材料,进行了愈伤组织的诱导、继代培养、悬浮培养研究,建立了摇瓶悬浮培养体系,测定了培养细胞生长和次生代谢产物总蒽醌积累的动态变化。 愈伤组织诱导培养中,外植体类型、光照条件、激素、温度条件对愈伤组织的诱导均有影响。经过筛选确定唐古特大黄子叶为适合的诱导材料,在此基础上进一步优化了愈伤组织培养条件,得到了愈伤组织生长的适宜培养基:MS+2,4-D1.0 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+NAA 2.5 mg/L,蔗糖浓度3%,初始pH值为5.8,温度25℃。同时测定了愈伤组织在36 d内的生长曲线,在培养的第30 d,愈伤组织生长可达到最大值。 悬浮培养过程中研究了摇床转速、接种量、碳源种类、蔗糖浓度、基本培养基、初始pH值对唐古特大黄悬浮细胞生长的影响,得到了悬浮培养的适宜生长条件:MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+NAA 2.5 mg/L,蔗糖浓度4%,接种量1g/40ml鲜重,装液量为40 ml/100ml,转速为120 rpm,初始pH值为5.8,温度25℃。 在悬浮培养中,研究了唐古特大黄悬浮细胞在36 d内的生长曲线,培养液pH值的变化情况及细胞中总蒽醌积累规律。细胞的生长曲线呈“S”形,分为延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期;其最佳收获期为第30 d;其培养液pH值呈先下降后上升趋势;细胞中总蒽醌积累规律也呈“S”形曲线,在培养的第30 d,细胞中总蒽醌可达到最大值。 研究了诱导子水杨酸(SA)对唐古特大黄悬浮细胞培养中细胞生长和总蒽醌积累的影响。SA对细胞的生长和总蒽醌的积累有影响,其中0.1 mg/L和1.0 mg/LSA促进了细胞的生长和总蒽醌的积累。


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