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亚麻LuBRI1和LuBES1基因核心片段克隆与再生体系的建立

陈秀娟  
【摘要】:亚麻是用途广泛的经济作物,株高和工艺长度是与出麻率和原茎产量呈显著正相关的农艺性状,也是重要的育种目标。油菜素甾醇(Brassinosteroids,BRs)是调节细胞伸长和分化方面具有显著作用的植物甾醇类激素。BRI1是BR信号通路的重要受体元件,BES1是参与BR调节基因表达的转录因子。本实验以亚麻品种“范妮”为实验材料,克隆了BR信号途径中LuBRI1和LuBES1基因的核心片段,建立了较稳定的“范妮”器官发生途径的再生体系,研究了部分激素在调节亚麻种子萌发、细胞生长方面的作用。 实验结果表明:(1)CTAB法是较适于亚麻DNA的提取方法,获得高质量的DNA可以用于后期长片段扩增。通过同源比对,设计简并引物,经PCR扩增得到832bp的LuBRI1和1000bp左右的LuBES1核心序列。用Site-finding PCR进一步得到1700bp左右的LuBES1核心片段。(2)在含20种不同激素组合的1/2MS培养基均能诱导出愈伤并直接得到再生芽。其中以1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.9mg/L KT+0.2mg/L IAA诱导效果最佳,出愈率高,形成再生芽的愈伤块多。1/2MS+0.3mg/L NAA+0.05mg/L IBA培养基最适合‘范妮’的再生根诱导。进一步确定了Kan和Hyg作为亚麻遗传转化的筛选试剂的浓度分别为120mg/L和40mg/L。(3)亚麻种子萌发生理实验确定了GA3促进萌发的最佳剂量是1mg/L;ABA抑制亚麻萌发的最小剂量是50mg/L;表油菜素内酯(2,4-epi-brassinolide,epiBL)处理,黑暗条件调节亚麻下胚轴伸长最适浓度为1000nM,光照条件下为1nM的epiBL处理下的下胚轴最长;根在光照和黑暗下最适epiBL量分别为100nM和1nM,以上实验结果为后期研究植物激素调节亚麻生长发育打下基础。


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