赤霉素相关转录因子NBF的进一步功能分析

【摘要】：赤霉素(GA)生物合成的调控对植物的发育及其对环境的适应有着极为重要的作用。研究表明转录因子在调控基因表达上起着重要作用,它可以通过与DNA 直接结合,把信号最终传递至靶基因,通过关闭、开启、增强和减弱等调控作用来控制靶基因表达,使植物基因转化能获得好的结果。中国农科院王磊博士实验室利用酵母单杂交实验从玉米中成功克隆获得一个新的转录因子NBF,它是玉米中首次报道的GA 合成调控相关的转录因子。 本论文在已有实验的基础上又对NBF 做了进一步功能分析的研究,旨在阐明NBF 所结合的顺式元件的核心序列,同时揭示NBF 与所结合的DNA 之间相互作用的具体机制,明确NBF 与GA 之间的调控关系,与生产应用相结合。通过本论文的研究,得出如下主要结论: 1. 通过酵母单杂交实验,对NBF 所结合的顺式元件的核心序列进行了分析,结果表明在酵母细胞内NBF 所结合的顺式元件的核心序列很可能是GCCANNTGGC。 2. 在转基因拟南芥中,Northern blotting分析表明NBF基因在N36、N43 和N51 这三个株系中有表达。 3. 采用Angilent 基因芯片对转基因植株进行了分析,结果表明NBF调控了与赤霉素等激素相关的、与MYB 等转录因子相关的、与抗病相关的、与光合相关的等等十几类基因的表达。 4. 采用RT-PCR 方法进一步验证了NBF 在转基因拟南芥植株中可能调控的靶基因,N43 植株中NBF 正向调控了12S 十字花科植物种子储藏蛋白相关基因的表达;N36、N43和N51 植株中NBF 正向调控了CCHH 指蛋白2 类似蛋白相关基因的表达;N36、N43 和N51 植株中NBF 反向调控了赤霉素调节蛋白相关基因的表达。